α-单月桂酸甘油酯对猪繁殖与呼吸综合征病毒抑制机制的探究

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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种急性传染病。目前PRRS防控主要是通过疫苗,但是疫苗防护效果并不理想,所以寻找新的PRRS防控方法十分必要。本研究旨在探究α-单月桂酸甘油酯(α-Glycerol monolaurate,α-GML)对PRRSV的抑制效果以及其作用机制。本研究主要分为两个试验。试验一,研究不同的α-GML处理方式对PRRSV的抑制效果。(1)通过电镜观察、RT-PCR及Western blot确定所得病毒是PRRSV病毒,并采用Reed-Muench法测定病毒效价(TCID50)在10-5.25/0.1m L。(2)通过MTT法筛选出α-GML的最大无细胞毒性浓度为25μg/m L。(3)设置空白对照组、α-GML对照组、PRRSV组,α-GML+PRRSV组,采用α-GML后处理与共处理2种方式进行处理,利用RT-q PCR、Western blot以及间接免疫荧光法对PRRSV核衣壳蛋白N的表达量进行测定,结果显示,α-GML后处理对PRRSV核衣壳蛋白N的基因与蛋白表达均无明显抑制的作用(P>0.05),而α-GML与PRRSV共处理可显著降低核衣壳蛋白N的基因与蛋白表达量(P<0.01)。表明α-GML与PRRSV共处理具有抑制PRRSV的作用。试验二,依据试验一的结果,探究α-GML抑制PRRSV的机制。(1)α-GML共处理对病毒活力的影响。试验分为空白对照组、PRRSV组和α-GML+PRRSV组,采用Reed-Muench测定样品的病毒效价,并采用ELISA测定样品的病毒量,结果显示α-GML与PRRSV共处理极显著降低病毒效价(P<0.001),并明显减少病毒量(P<0.001),表明α-GML处理能明显降低病毒活力,甚至具有直接杀灭病毒的作用。(2)α-GML对病毒囊膜结构及细胞受体的影响。试验分为空白对照组、α-GML对照组、PRRSV组以及α-GML+PRRSV组,结果显示α-GML与PRRSV共处理,可显著降低PRRSV囊膜蛋白M以及GP5的基因表达量(P<0.01),并显著下调了细胞表面受体CD163的基因相对表达量(P<0.05),表明α-GML具有影响PRRSV囊膜以及受体表达的作用。(3)α-GML对免疫相关细胞信号通路的调节作用。试验分为空白对照组、α-GML对照组、PRRSV组以及α-GML+PRRSV组,测定TLR7/8-Myd88-NF-κB/IFNα信号通路上关键因子的基因与蛋白表达,结果表明,与PRRSV组相比,α-GML与PRRSV共处理可显著下调TLR7、TLR8、TRAF6、TRAF3以及NF-κB1(p50)的基因表达(P<0.05),显著上调NF-κB抑制酶亚基IκKβ的基因表达(P<0.05),并下调Myd88与NF-κB1(p50)的蛋白表达量,显著上调NF-κB通路抑制酶IκB的蛋白表达量(P<0.05),同时显著减少促炎因子TNF-α的分泌(P<0.05),表明α-GML处理抑制了由PRRSV感染引起的NF-κB通路的激活,一定程度上缓解相关炎症反应。综上所述,α-GML与PRRSV共处理具有抑制PRRSV的作用。α-GML抑制PRRSV的机制主要可能是α-GML降低PRRSV的病毒活力,降低PRRSV囊膜蛋白M与GP5以及细胞受体CD163的表达,同时抑制PRRSV引起的NF-κB通路的激活,并减少TNF-α的分泌。
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