茶氨酸对酒精损伤HL7702细胞修复与构建绿茶指纹图谱的研究

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茶氨酸,茶叶中存在的一种不同寻常的,不参与蛋白质的合成的游离氨基酸,在水中极易溶解,谷氨酸和乙胺是它在体内降解产生的两种产物。茶氨酸具有保护神经、降血压、镇静等功能,其在药理方面的作用已经受到了广泛的关注。茶氨酸在不同种类的茶中含量不同,经实验发现,绿茶中的茶氨酸含量较高。中国知名绿茶竹叶青,由于其精细的加工工艺,生产过程中会产生大量茶末等副产物,但这些副产物的利用率一般较低。据相关研究报道,合成的茶氨酸生物活性远低于天然茶氨酸,以竹叶青茶末中,优化茶氨酸提取工艺,经过超滤、树脂吸附,离子交换层析等一系列分离纯化方法后可获取天然性质的茶氨酸。研究该茶氨酸提取物对酒精诱导人正常肝细胞氧化损伤修复作用,以茶氨酸含量作为绿茶品质评价指标,探讨绿茶的质量控制及质量标准。主要研究结果如下:
  1.响应面实验结果表明,提取茶氨酸最优工艺条件为:提取液固比为15:1,提取温度80℃,提取时间60min;
  2.浸提后的茶汤中有不少大分子蛋白质、多糖等物质。需经过超滤处理去除,通过综合比较各主要成分截留量选择孔径为10KD的超滤离心管,超滤后茶汤清亮,绝大多数大分子蛋白被去除,茶多糖和茶多酚的去除率分别为35%和25%左右,茶氨酸处理前后含量变化很小;
  3.树脂吸附进一步去除茶汤中的茶多酚、咖啡碱等物质,通过比较吸附能力选择PA6树脂对茶氨酸进行静态吸附,吸附量达到了62.38mg/g,且对茶氨酸的吸附量很少;茶汤中的可溶性多糖利用乙醇沉淀法去除,醇沉后茶汤中主要含茶氨酸、咖啡碱等物质。用NKA-II树脂进行动态层析,以分离茶氨酸和咖啡碱,经速率为1BV/h的蒸馏水洗脱,收集洗脱液,冷冻干燥后得到纯度达91.23%的茶氨酸提取物;
  4.选择不同浓度的茶氨酸提取物培养HL7702细胞,考察茶氨酸对HL7702细胞的毒性作用,MTT法测定细胞的存活率,结合实际情况确定茶氨酸给药浓度为200-800μg/mL;选取500-1000mmol范围内,梯度设置为100mmol的6个酒精浓度处理组对HL7702细胞进行初步处理,测定细胞的存活率后确定酒精造模浓度为800mmol;
  5.以不同浓度的茶氨酸提取物预保护模型浓度酒精处理过的细胞,测定细胞存活率;测定过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、抗氧化总能力(T-AOC)五个指标。和模型组比较,茶氨酸显著提高了酒精损伤模型中HL7702的存活率,对HL7702细胞内H2O2和MDA的生成起到了一定的抑制作用,而SOD活性升高,GSH-PX和T-AOC含量也增加,实验证实了茶氨酸在不同方面均被证明对酒精诱导人正常肝细胞氧化损伤具有特定的保护作用;
  6.茶氨酸作为茶叶中的一种特征氨基酸,与绿茶等级呈正相关,将其作为绿茶质量评价的特征因子,对15种产地为四川的绿茶进行了HPLC测定,研究建立了绿茶茶氨酸指纹图谱,通过对不同品种和产地的绿茶进行分析比较,计算出各品种绿茶中茶氨酸的含量,为茶叶质量控制提供参考。
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