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当今,神经退行性疾病严重的影响着患者的健康,尤其是对于高质量生活的追求,老龄化社会的到来时这一问题更加凸现出来。传统药物治疗的高副作用以及无根本的疗效导致移植手术势在必行。但是,胚胎移植所面临法律和伦理的多重问题使之无法满足广大病人的切实需求。因此,神经干细胞及其诱导分化的前体细胞作为移植供体成为最具前景的供体来源。从干细胞本身的研究现状来看,我们对于其增殖和分化的内源机制、外部环境信号还并不甚了解,本文就是针对这些迫在眉睫的问题进行研究。
首先,在确定神经干细胞胚胎发生的具体位置和时期的基础上,选择合适手段,在体外建立起一套完整的神经干细胞培养、增殖、传代、分化、鉴定和保存体系。为后续的移植、转染实验提供细胞来源,也为研究干细胞增殖和分化的内源机制和外部信号建立稳定的实验平台。
其次,利用电转化作为转染手段标记体外扩增的神经干细胞,并将标记细胞进行正常大鼠和PD模型大鼠的移植实验,从实际的行为学改善以及组织学切片染色等方面观察移植效果,追踪在体内的存活、迁移和分化的移植干细胞,以提出具体治疗PD的有效方案,以及神经干细胞体内功能性分化实现的方式和途径。
再次,鉴定一些常见的生长因子和神经递质对于神经干细胞体外增殖和分化的实际作用。包括这些作用的内在联系和外在特征,把握神经干细胞发育方式的基本结构和规律,为定向诱导神经干细胞提供可行性的方案。
最后,利用钙离子成像的方法观察神经干细胞的单细胞增殖和分化过程。分辨此过程中钙信号的具体模式和伴随作用,通过对照增殖和分化过程的明显差异以及结合上述的实验证据,提出调控神经干细胞分化作用的假设——钙活动与神经干细胞分化的相互依存作用。从而作为定向诱导神经干细胞功能性分化的基础,更希望我们有益的探索为神经干细胞早日应用于临床治疗神经退行性疾病做出贡献。