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目的:研究人参皂苷Rb3对大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)氧化损伤的保护作用。 方法:采用DPPH法和ORAC法考察人参皂苷Rb3的体外抗氧化活性;采用CCK-8法测定细胞活力,用H2O2诱导IEC-6细胞建立氧化应激损伤模型,考察不同浓度人参皂苷Rb3对正常以及氧化损伤IEC-6细胞活力的影响;采用DCFH-DA荧光探针法检测IEC-6细胞内ROS水平;采用分光光度法测定IEC-6细胞内丙二醛(MDA)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、总谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力;采用TRIzol法提取IEC-6细胞总RNA,RT-PCR法验证引物特异性,qRT-PCR法检测人参皂苷Rb3对IEC-6细胞内Keap1、Nrf2基因表达水平的影响;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测人参皂苷Rb3对IEC-6细胞Keap1、Nrf2蛋白表达水平的影响。 结果:1人参皂苷Rb3具有清除DPPH自由基的能力,其清除能力与人参皂苷Rb3的浓度呈正相关。 2人参皂苷Rb3具有较强的氧化自由基吸收能力,每微克人参皂苷Rb3的Trolox当量为(23.551±1.558)μM。 3成功建立了IEC-6细胞氧化应激损伤模型,H2O2的最适损伤浓度为300μM。 4人参皂苷Rb3在160μg/mL浓度时对正常IEC-6细胞具有一定的毒性作用,而在80μg/mL及以下浓度时对细胞活力无显著影响。 5人参皂苷Rb3能够提高氧化损伤IEC-6细胞的活力,在80μg/mL浓度时细胞活力由(52.97±1.28)%显著升高至(65.71±1.47)%。 6人参皂苷Rb3在40μg/mL及80μg/mL浓度时能够显著降低氧化损伤IEC-6细胞内的ROS水平。 7人参皂苷Rb3能够显著降低氧化损伤IEC-6细胞内的MDA水平,同时提高SOD和CAT的活力,但对GSH-Px的活力无显著影响。 8从IEC-6细胞中提取的总RNA质量较好,28S和18S条带清晰,OD260/280在1.8~2.2之间。 9 Keap1、Nrf2和GADPH基因的扩增产物均为单一条带,无杂带和引物二聚体出现,引物特异性较好。 10人参皂苷Rb3能够下调氧化损伤IEC-6细胞中Keap1基因表达量及蛋白表达水平,同时上调Nrf2基因表达量及蛋白表达水平。 结论:人参皂苷Rb3具有体外抗氧化活性,能够通过降低IEC-6细胞内ROS水平、降低脂质过氧化(MDA)水平、提高抗氧化酶(SOD、CAT)活力以及介导Keap1/Nrf2信号通路,从而对H2O2诱导的氧化损伤起到保护作用。