人参皂苷Rb3对IEC--6细胞氧化损伤的保护作用研究

来源 :长春中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gsdx2009
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目的:研究人参皂苷Rb3对大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)氧化损伤的保护作用。  方法:采用DPPH法和ORAC法考察人参皂苷Rb3的体外抗氧化活性;采用CCK-8法测定细胞活力,用H2O2诱导IEC-6细胞建立氧化应激损伤模型,考察不同浓度人参皂苷Rb3对正常以及氧化损伤IEC-6细胞活力的影响;采用DCFH-DA荧光探针法检测IEC-6细胞内ROS水平;采用分光光度法测定IEC-6细胞内丙二醛(MDA)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、总谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力;采用TRIzol法提取IEC-6细胞总RNA,RT-PCR法验证引物特异性,qRT-PCR法检测人参皂苷Rb3对IEC-6细胞内Keap1、Nrf2基因表达水平的影响;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测人参皂苷Rb3对IEC-6细胞Keap1、Nrf2蛋白表达水平的影响。  结果:1人参皂苷Rb3具有清除DPPH自由基的能力,其清除能力与人参皂苷Rb3的浓度呈正相关。  2人参皂苷Rb3具有较强的氧化自由基吸收能力,每微克人参皂苷Rb3的Trolox当量为(23.551±1.558)μM。  3成功建立了IEC-6细胞氧化应激损伤模型,H2O2的最适损伤浓度为300μM。  4人参皂苷Rb3在160μg/mL浓度时对正常IEC-6细胞具有一定的毒性作用,而在80μg/mL及以下浓度时对细胞活力无显著影响。  5人参皂苷Rb3能够提高氧化损伤IEC-6细胞的活力,在80μg/mL浓度时细胞活力由(52.97±1.28)%显著升高至(65.71±1.47)%。  6人参皂苷Rb3在40μg/mL及80μg/mL浓度时能够显著降低氧化损伤IEC-6细胞内的ROS水平。  7人参皂苷Rb3能够显著降低氧化损伤IEC-6细胞内的MDA水平,同时提高SOD和CAT的活力,但对GSH-Px的活力无显著影响。  8从IEC-6细胞中提取的总RNA质量较好,28S和18S条带清晰,OD260/280在1.8~2.2之间。  9 Keap1、Nrf2和GADPH基因的扩增产物均为单一条带,无杂带和引物二聚体出现,引物特异性较好。  10人参皂苷Rb3能够下调氧化损伤IEC-6细胞中Keap1基因表达量及蛋白表达水平,同时上调Nrf2基因表达量及蛋白表达水平。  结论:人参皂苷Rb3具有体外抗氧化活性,能够通过降低IEC-6细胞内ROS水平、降低脂质过氧化(MDA)水平、提高抗氧化酶(SOD、CAT)活力以及介导Keap1/Nrf2信号通路,从而对H2O2诱导的氧化损伤起到保护作用。
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目的对不同产地、不同年限人参化学成分的差异研究;基于人参皂苷等成分能够降低血糖而进行的中医古籍中人参治疗消渴的用药规律分析。方法利用快速分离液相-四极杆-飞行时间质谱(RRLC-QTOF-MS),结合多元统计分析法分析人参中的化学成分,寻找差异化合物,通过一级质谱和串联质谱信息进行化合物鉴定,并观察这些化合物在不同人参样本中的变化趋势;利用计算机程序perl语言、R语言等相关多元统计分析技术对中医