研究背景 　　胃癌( Gastric Cancer)是东亚国家,包括中国、日本和韩国在内的常见肿瘤,全球胃癌死亡者每年超过 70万。我国是胃癌的高发地区,据 2005 年我国公布的数据显示[1],我国胃癌发病率在男性中达 37.1/10 万,女性中为 17.4/10万,死亡率分别为 15/10 万和 13.3/10 万。由此可见胃癌是严重危害人类健康的常见肿瘤之一。而临床大多数胃癌患者的死因是术后复发和转移,所以寻找手术以外的治疗胃癌的药物和方法是目前抗肿瘤研究的一个重要课题。中医药疗法是胃癌综合治疗的重要手段之一,中药对于减轻放化疗不良反应、降低手术后复发率、改善患者的生活质量、延长患者生存期、均有着重要的意义。 　　胃康舒宁方是本课题组在大量临床临床肿瘤治疗经验中,立足于解毒化浊、补气养阴为治则,将多法合于一方,总结出来的。该方是针对胃癌和胃癌前病变临床症状治疗,以及手术后放化疗期间症状改善的有效方剂。能在很大程度上改善胃癌患者的生存质量,延长患者的生存期。胃康舒宁虽然临床治疗胃癌效果明显,但其作用机理仍不明确,还有待进一步研究。 　　目的： 　　通过观察中药复方胃康舒宁诱导体外人胃腺癌细胞 SGC-7901 凋亡的情况,并探讨其作用机制,为治疗胃癌中药复方的研究提供思路。 　　方法： 　　用MTT法检测胃康舒宁对胃癌细胞株SGC-7901生长抑制作用；观察胃癌细胞的光镜结构和电镜结构的变化；采用流式细胞仪技术检测胃康舒宁对胃癌细胞株细胞周期和细胞凋亡的影响,并计算出凋亡率；应用免疫细胞化学方法检测胃康舒宁对 SGC-7901 细胞株中 Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、Bid等相关蛋白的影响。 　　结果： 　　1. MTT法显示胃康舒宁作用人胃腺癌SGC-7901细胞株24h、48h、72h、96h后,与空白对照组相比,均能使细胞株OD值降低,抑制率随时间增长和浓度增高而增高。 　　2. 光镜下能直接观察到胃康舒宁作用胃癌细胞株72h后部分细胞变小、变圆,细胞核变小,包膜完整但出现发泡现象,细胞贴壁受到影响。 　　3. 电镜下显示胃康舒宁能造成细胞核内染色质聚成团块,核膜完整,细胞内线粒体变小、数目减少,胞浆内空泡增加,滑面内质网扩张,细胞膜完整有突起。 　　4. 流式细胞仪检测细胞周期结果显示：胃康舒宁作用于SGC-7901细胞48h、72h后与空白对照组比较均能使G1/G0期细胞显著增多(P<0.05),使S、G2/M期细胞较空白对照组显著减少(P<0.05),G1/G0期细胞数量与作用时间增长和浓度升高而增加。 　　5. 流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示：胃康舒宁作用于SGC-7901细胞株48h、72h均能明显诱导胃癌细胞凋亡(P<0.05),其作用为0.8mg/mL浓度组的作用效果最佳,其次为0.4mg/mL浓度组和0.2mg/mL浓度组。 　　6. 免疫细胞化学检测相关蛋白表达结果显示：与空白对照组比较胃康舒宁能显著增强胃癌细胞株SGC-7901内Bax、Caspase-3、Caspae-9、Bid蛋白的表达(P<0.05),而Bcl-2蛋白的表达显著减弱(P<0.05)。 　　结论： 　　1. 胃康舒宁能抑制人胃癌细胞 SGC-7901 细胞的体外增殖,其抑制作用呈剂量-时间-效应关系,并能显著影响人胃腺癌细胞 SGC-7901 细胞的显微结构和超微结构。 　　2. 胃康舒宁对 SGC-7901细胞周期各时相均有影响,且能将 SGC-7901细胞周期阻滞在G0/G1期,且有显著的浓度依赖性。 　　3. 胃康舒宁能体外诱导人胃腺癌细胞SGC-7901的凋亡,且凋亡率与浓度呈正相关。且其凋亡机制可能与胃康舒宁导致 Bax 表达增强,Bcl-2 表达减弱,Bid的活化能促使线粒体通透性增强,引起线粒体膜电位下降,cytochrome C释放,使caspase-9增多,引发下游caspase-3活化有关。