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人Vasorin蛋白(简称为VASN)是一种I型跨膜糖蛋白,相对分子量大约为72kDa,2004年在血管平滑肌被发现,Vasorin蛋白减少时可以调控TGF-β的表达从而启动主动脉的损伤应答。近年来研究表明,Vasorin蛋白在肝癌、乳腺癌以及神经胶质细胞瘤中均为高表达,在TNF-α刺激或者低氧的条件下,其表达水平显著提高,Vasorin蛋白具有保护细胞免受低氧诱导的细胞凋亡的作用,可能具有促进肿瘤进程的作用。我们实验室在前期的工作中已经证实Vasorin在肝癌细胞HepG2中高表达,并且当有适度乙醇刺激时可以促进HepG2中Vasorin表达增高,Vasorin蛋白能以外泌体的形式从HepG2细胞分泌出来并转运进入HUVEC细胞,促进HUVEC的迁移,因此推测Vasorin与肝癌的发展有密切关系。本实验室前期工作中,为构建Vasorin基因缺失的细胞株,就采用了CRISPR/Cas9技术。本研究中,我们通过CCK8和Transwell两种实验方法分别检测了敲减细胞株的增殖能力和迁移能力的变化,结果表明和野生型细胞株相比,敲减株的这两种能力明显下降,提示HepG2细胞中的Vasorin具有重要生物学功能。已有报道显示Vasorin蛋白在乳腺癌细胞中高表达,并且其高表达与三阴乳腺癌细胞的侵袭能力、预后差相关。而Vasorin在乳腺癌中发挥怎样的生物学功能鲜有报道。本研究初步探讨了Vasorin在三阴乳腺癌细胞系MB231中的生物学功能。我们首先利用Vasorin特异siRNA敲低MB231中的Vasorin蛋白,然后观察了细胞增值与迁移能力的变化。实验结果显示,敲低Vasorin蛋白的MB231细胞增殖和迁移能力明显减弱,此结果与HepG2细胞上的作用一致。已有的研究显示,乙醇是比较公认的肿瘤促发剂,但对于具体的信号通路没有明确定论。。本实验室前期研究结果表明,乙醇与肝癌细胞的发生发展有关,比如乙醇能够促进HepG2细胞中Vasorin表达。本研究就乙醇是否影响MB231细胞中Vasorin表达开展了相关研究。我们分别用含有25、50、100mM乙醇的培养基培养MB231细胞24h,经Western Blot和qRT-PCR实验分别检测Vasorin蛋白和mRNA水平的变化,结果显示二者均显著升高,并且与培养基中的乙醇含量正相关。接着,我们进一步探索了乙醇上调Vasorin表达的机制。利用siRNA敲低MB231细胞中HIF-1α的表达,Vasorin含量也随之降低,初步证明Vasorin的表达与HIF-1α密切相关。实验室前期制备了几株Vasorin小鼠单克隆抗体,为了获得相应的抗原表位,我们又利用噬菌体肽库展示技术针对其中V20抗体开展了研究。经过三轮筛选,我们获得8个阳性克隆,经过DNA测序、序列比对分析,获得了7条序列与Vasorin同源。选取其中两条模拟表位肽4号表位肽和9号表位肽进行化学合成,经过ELISA实验检测,结果显示两条小肽均能特异结合V20,并且Vasorin能够竞争模拟肽与V20的结合。结果表明这两天肽均为Vasorin的模拟抗原表位,为我们进一步研究相应的结构域功能奠定了基础。