伪结核棒状杆菌（Corynebacterium pseudotuberculosis）引起的人畜以炎性肉芽肿和化脓为特征的慢性传染病,是世界上公认最难防制的疫病之一。该病原感染引起的疾病包括牛的溃疡性肉芽肿和乳房炎、羊干酪样淋巴结炎、马溃疡性淋巴管炎、人的淋巴结炎、肺炎及心内膜炎等。在临床上,该病原以感染小反刍动物最为普遍,尤其是山羊和绵羊,所引起的羊干酪样淋巴结炎呈全世界分布,广泛流行,造成养羊业的重大损失,与此同时,该病原在动物中的感染和流行具有传播给人的风险,对人类健康具有潜在的威胁。因此,如何有效防制伪结核棒状杆菌病的发生与流行一直是养殖者和科研人员迫切需要解决的问题。伪结核棒状杆菌病发病具有隐蔽性,早期不易诊断,而药物治疗和手术治疗的效果都不够理想,因此,研发有效的疫苗防控该病具有重要价值。目前关于伪结核棒状杆菌病的疫苗研究包括灭活苗、活苗和亚单位疫苗等,其中临床上以灭活苗的应用最为广泛。研究表明单纯使用伪结核棒状杆菌灭活菌体制备的灭活苗免疫山羊可显著降低肉芽肿数量,且被感染山羊的临床病程更温和。而以伪结核棒状杆菌菌体加上外毒素灭活制备的疫苗对山羊的免疫保护效果优于单纯使用该病原灭活菌体免疫。鉴于目前我国山羊养殖中遭受伪结核棒状杆菌感染的现象十分普遍,且国内尚无商品化疫苗,本文以实验室前期从临床感染山羊分离鉴定获得的伪结核棒状杆菌为材料,进行了伪结核棒状杆菌疫苗候选株筛选、灭活苗制备条件优化及免疫小鼠的抗体检测等试验,旨在为研发能有效防控山羊伪结核棒状杆菌的灭活苗奠定基础。具体研究结果如下:1.山羊伪结核棒状杆菌疫苗候选株的筛选为筛选毒力强、免疫原性好,以及性状稳定的山羊伪结核棒状杆菌灭活苗候选株,本文首先以37株伪结核棒状杆菌临床分离株对昆明系小鼠进行初步致病力试验,筛选毒力比较强的4株菌,再进一步重复致病力试验,最后确定2株伪结核棒状杆菌强毒株,测定它们的半数致死量。将所选菌株用甲醛灭活后免疫昆明系小鼠,测定其免疫原性,同时进一步对所选菌株连续传代后检测其稳定性。结果显示:万州株（WZ）、江津株（JJ-5）、忠县株（ZX-6）和城口株（CK-1）毒力较强;进一步致病力重复试验验证发现万州株（WZ）的毒力最强,而忠县株（ZX-6）的毒力较强且可造成明显神经症状,它们的LD50分别为8.01×10~4CFU和4.68×10~5CFU;将WZ株和ZX-6株灭活后均以2×10~9CFU/m L的抗原浓度（一免皮下注射0.3 m L/只,间隔7 d后二免,二免皮下注射增加为0.6 m L/只）免疫昆明系小鼠,二免28 d后,对应攻毒的WZ株和ZX-6株剂量为3.20×10~6CFU/只,结果显示WZ株的免疫保护率为70%,而ZX-6株的免疫保护率则为30%;交叉保护中WZ株灭活苗对ZX-6株攻毒保护率为60%,而ZX-6株灭活苗受WZ株的攻毒则无交叉保护力;WZ株原代与传至10代、20代后的免疫原性检测结果较稳定。表明WZ菌株毒力强、免疫保护率高、交叉免疫保护性及稳定性好,因此,以WZ菌株作为伪结核棒状杆菌灭活苗候选菌株供本文进一步研究。2.伪结核棒状杆菌灭活苗制备条件优化为优化伪结核棒状杆菌灭活苗制备条件,本研究进行疫苗候选株培养基、抗原灭活条件、佐剂种类和乳化条件等试验筛选。并以各优化条件制备的伪结核棒状杆菌双组分灭活苗,免疫接种昆明系小鼠,分别在首免后的14 d、28 d（二免14 d）和35 d（二免21 d）采集小鼠眼球全血,分离血清,采用间接ELISA方法测定血清抗体水平,首免后35 d,以WZ强毒株攻毒。结合免疫后小鼠对WZ强毒株攻毒的保护率和抗体水平,确定伪结核棒状杆菌灭活苗制备条件。结果显示:以马丁肉汤+6%胎牛血清+0.5%吐温80培养基置于摇床37℃、200r/min扩培24 h（处于对数期）的活菌浓度最高,细菌总数为2.15×10~8 CFU/m L;以浓度为0.4%甲醛灭活24 h可完全灭活伪结核棒状杆菌病原（6×10~9 CFU/m L）;在所采用的三种佐剂中,206佐剂试制的灭活苗保护率最高,达到90%;进一步对206佐剂乳化条件进行优化,其中扩培24 h的抗原在磁力搅拌器上32℃、300r/min、乳化5 min制备的疫苗免疫效果最好,其免疫保护率为90%,抗体效价高达1:512。因此确定该疫苗最佳的生产制备条件为:马丁肉汤+6%胎牛血清+0.5%吐温80为培养基,抗原于37℃、200 r/min扩培24 h,0.4%甲醛灭活24 h,加入206佐剂置32℃、300 r/min、乳化5 min。综上所述,本研究成功筛选获得了山羊伪结核棒状杆菌疫苗候选株,确定了伪结核棒状杆菌灭活苗最优制备条件。通过对小鼠的免疫试验证实该疫苗安全有效,可诱发机体产生良好的抗体水平,为进一步制备伪结核棒状杆菌灭活苗用于山羊的临床试验奠定了科学基础。