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玉米黄质亦称玉米黄素(Zeaxanthin,β-carotene-3,3’-diol),是玉米籽粒中含量最丰富的类胡萝卜素。同时p-胡萝卜素、隐黄质和叶黄素常与玉米黄质构成类胡萝卜素混合物。玉米黄质为脂溶性化合物,其分子中含有40个碳和11个共轭双键。玉米黄质和叶黄素互为同分异构体,而叶黄素是眼睛视网膜和晶状体内不可缺少的类胡萝卜素,它们对维持眼睛健康具有特别重要的作用。类胡萝卜素摄入量较高时,老年性黄斑变性的患病风险较低,在各种类胡萝卜素中,这方面效果最突出的就是叶黄素和玉米黄质。通过基因工程创造富含玉米黄质的玉米种质,可望培育出具有保健作用的鲜食玉米品种。玉米籽粒中,玉米黄质经缩合、脱氢、环化、羟基化等过程合成,又经氧化等步骤分解。玉米黄质环氧化酶(Zeaxanthin epoxidase,Zep),就是氧化分解玉米黄质的关键酶。本研究利用RNA干涉技术构建Zep基因干涉载体,农杆菌介导转化玉米胚性愈伤组织,以期为培育玉米黄质高效积累的富含玉米黄质转基因材料。1.玉米黄质环氧化酶基因RNA干涉表达载体构建。以玉米自交系"18-599W"的mRNA为模板,克隆Zep基因547bp片段,同时在两端引入限制性内切酶酶切位点,以正反两个方向插入RNA干涉工程质粒pSKintron的150bp内含子两端,再将这一反向重复序列克隆至(?)pTF101.1M质粒中,构建成单子叶植物RNA干涉载体(pTFZepRNAi).2.玉米愈伤组织转化以玉米优良自交系“18-599R”和"18-599W"的幼胚为外植体,诱导培养愈伤组织,利用农杆菌介导发转化,经过三轮除草剂梯度筛选后分化再生植株84株,移栽至田间共存活79株。3.T0代再生植株的PCR检测设计三条引物覆盖对除草剂筛选阳性材料进行PCR检测。使用Fuz/Ruz和ruz/ruz进行设计三条引物覆盖,引物Fuz/Ruz是跨启动子的目的片段特异性扩增,引物ruz/ruz是对插入载体内含子的特异性扩增。通过特异性引物对转基因的抗性愈伤分化得到再生植株进行分子检测获得了9个阳性植株。基于本研究分子水平检测的阳结果以及根据田间植株表型的观察,可以进一步为培育出富集玉米黄质玉米品种提供材料。