自噬调控慢性鼻-鼻窦炎中MUC5AC表达作用的研究

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目的:探讨自噬对慢性鼻-鼻窦炎(CRS)患者中人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)诱导的MUC5AC过表达产生的影响和作用。方法:1.QRT-PCR、IHC、ELISA检测CRSsNP、CRSwNP和对照组的鼻窦黏膜中的HNE、LC3B、JNK、AP-1和MUC5AC表达;2.体外培养人鼻黏膜上皮细胞(HNECs),用自噬体与溶酶体融合的抑制剂Bafilomycin A1处理HNE刺激的细胞,检测LC3BII的蛋白含量和MUC5AC的表达;透射电镜观察HNE处理后HNECs中的自噬体;3.自噬基因BECN1、ATG5的siRNA慢病毒载体和AP-1的siRNA慢病毒载体作用后,HNE刺激HNECs,qrt-pcr、WB、ELISA检测JNK、P-JNK、AP-1、P-AP-1、MUC5AC蛋白和MUC5AC mRNA的表达情况;JNK特异性阻断剂作用后,用重组HNE刺激,qrt-pcr、WB、ELISA检测AP-1、P-AP-1和MUC5AC蛋白及mRNA的表达情况。结果:1.与对照相比,通过qRT-PCR、IHC、ELISA发现CRSwNP和CRSsNP组的HNE、LC3B、JNK、AP-1、MUC5AC显着上调(P<0.05)。2.HNE(10nM,24h)组中,MUC5AC表达上调最显著;Bafilomycin A1处理后,WB显示LC3B-II表达明显增加且MUC5AC的表达下降;透射电子显微镜观察HNE刺激后发现有自噬体和自噬泡;3.自噬基因BECN1、ATG5、c-Jun的siRNA慢病毒载体作用后,其下游蛋白(p-JNK、p-c-Jun、MUC5AC)表达下降(p<0.05);JNK特异性阻断剂(SP600125)刺激后,c-Jun、MUC5AC表达下降(p<0.05)。结论:在CRS中HNE促进自噬的发生,从而激活JNK-AP-1通路而导致MUC5AC过度表达。
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