BAMBI在乳腺癌细胞系中的分布与表达

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前言腺癌是全球发病率较高的恶性肿瘤,是对人类健康与生命危害最大的恶性肿瘤之一。在我国,近二十年来乳腺癌发病率呈迅速上升趋势。已成为城市女性人群恶性肿瘤死亡的首要因素。因此,对乳腺癌相关基因的研究及探讨及发病机制及诊断标准、治疗方法具有极其重要的意义。BAMBI(BMP and activin membrane-bound inhibitor)基因是由Onichtchouk等于1999年发现的,定位于10号染色体p12.3-11.2区域,编码产物为一个由260个氨基酸组成的跨膜糖蛋白,分子量29108道尔顿,又称作伪受体(pseudoreceptor)、NMA(non-metastatic gene A protein),属于BAMBI家族。该家族成员与转化生长因子-βⅠ型受体胞外区都具有相似的结构。因此BAMBI能够整合到配体-受体复合物中,并与TGF-βⅡ型受体形成聚合物,但由于它不具有TGF-βⅠ型受体所特有的丝氨酸/苏氨酸激酶结构域,所以不能磷酸化胞浆内的Smad蛋白,从而在受体水平上阻滞TGF-β信号传导。有研究表明,对于乳腺癌等上皮组织来源的肿瘤而言,TGF-β可以抑制肿瘤细胞的增殖,而BAMBI在TGF-β信号通路中的负调节机制对肺癌的作用目前尚不清楚。另外,据报道BAMBI在人肺癌、结肠癌、肝癌中均存在表达上调,但在乳腺癌中的表达尚未报道。目的检测BAMBI在乳腺癌(breast cancer)细胞系中的表达与分布,探讨其与乳腺癌临床病理因素之间的关系。实验材料与方法一、乳腺癌细胞系三株细胞系MDA-MB-435s、MDA-MB-231、MCF-7分别为乳腺癌高度转移、中度转移和低度转移细胞系,用于免疫荧光、RT-PCR以及Western blot检测。二、半定量RT-PCR用RNAout提取RNA,合成BAMBI、GAPDH引物,应用两步法RT-PCR试剂盒合成cDNA链,然后进行PCR扩增。产物经2%琼脂糖凝胶电泳,用自动电泳凝胶成像分析系统采集图像,测定条带积分光密度值。三、细胞培养三株乳腺癌细胞系MDA-MB-435s、MDA-MB-231、MCF-7培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基,在37℃、5%CO2条件下孵育。四、Western blot检测离心收集细胞。加入适量裂解液,离心取上清。蛋白定量后电泳、转膜,封闭加入一抗(1∶1000)4℃过夜。次日加入二抗(1∶10000)常温2h,加入ECL试剂暗室曝光,用自动电泳凝胶成像分析系统采集图像,测定条带积分光密度值,计算BAMBI蛋白的相对含量。五、免疫细胞荧光染色收集细胞,细胞爬片,用多聚甲醛固定,封闭后加入一抗(1∶200)4℃过夜,次日加入FITC标记的二抗(1∶100)室温2h,PI(1∶1000)核复染,封片。应用激光共聚焦扫描显微镜系统观察采集图像。结果BAMBI蛋白主要表达在胞膜和靠近胞膜的胞浆,BAMBImRNA在MDA-MB-435s中的表达高于MDA-MB-231且其表达在MDA-MB-231中高于MCF-7。分别比较,差异具有显著意义(P<0.05)。MDA-MB-435s、MDA-MB-231、MCF-7的蛋白相对含量分别为0.963±0.06 1,0.957±0.048,0.769±0.103,差异有显著性意义(P<0.05)。结论实验结果揭示:BAMBI的异常高表达与乳腺癌的发生有关,且其表达高低与乳腺癌细胞系的转移能力有关。
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