农业生产中,植物的生长发育多受到各种环境因子的胁迫，诸如低温、干旱、盐碱等已成为主要的逆境胁迫因子，这些因素很大程度影响着农业的发展。CBF3（CRT/DRE-bindingfactor）蛋白就是这一类能调节低温相关基因的十分重要的转录激活因子。CBF3基因是在拟南芥中克隆并鉴定的转录激活因子，特异结合在DNA顺式调控元件DRE上，DRE包含COR基因簇，通过CBF3的不断超量表达来诱导COR基因表达。逆境诱导型启动子Rd29A是能够受到环境中干旱、低温、高盐等因素的诱导后使下游目的基因进行大量表达的基因,构建逆境诱导型启动子驱动调控的目的基因植物表达载体，对于目的基因在植物中高效与实用的选择性表达有重要的意义。CBF3基因和Rd29A基因能在干旱、低温及高盐胁迫条件下调控COR基因表达，并在上述逆境胁迫信号传递中起重要作用。当今对植物抗逆境中耐盐抗性的研究，大多集中于非耐盐植物中耐盐基因的研究，所以进展较慢。根据更深入的研究表明，在盐生植物中，有一种叫盐芥的耐盐植物较为适合耐盐性方面的研究。盐芥与拟南芥同为十字花科，其性质都具有以下相同特点：遗传特性、生活特性相似，具有植株较矮小、生长周期较短、种子数量多、自花传授粉、基因组较小、方便转化等特点。可以进一步发展盐芥作为一种新的模式植物系统进行相关性研究。转基因植物中的除草剂或抗生素抗性标记基因的生态环境和食用安全性一直颇有争议，选择标记基因的存在严重地阻碍了转基因植物的商品化进程和转化技术本身的有效性，无选择标记策略提供了解决抗生素或除草剂等标记基因所引起疑虑的一种新思路。由此可见，怎样培育无选择标记转基因作物已成为近年来植物基因工程研究的重点之一。本试验以拟南芥为研究材料，对其冷诱导相关的基因CBF3和逆境诱导型启动子Rd29A进行研究，以盐芥为研究材料，对其Na+/H+逆向转运蛋白结果如下：1.根据拟南芥的序列设计引物，通过PCR方法从植物拟南芥中克隆出冷诱导相关的基因CBF3和逆境诱导型启动子Rd29A。克隆的CBF3基因长750bp，编码216个氨基酸，与GeneBank公布的的序列相比对，核苷酸同源性达到100%，并利用生物信息学手段对其氨基酸序列、进化树等进行分析；启动子Rd29A全长为1425bp，与已报道的该启动子序列比较，其核苷酸同源性为100%。2.采用常规分子克隆技术，利用PMD18-T载体，成功地将CBF3基因和Rd29A启动子构建到双元植物表达载体pCAMBIA1301中，成功构建pCAMBIA1301-Rd29A-CBF3并通过冻融法将该重组质粒成功地导入根癌农杆菌菌株LBA4404中。3.根据盐芥的序列设计引物，通过RT-PCR方法从植物盐芥中克隆出相关耐盐基因ThNHX1。克隆的ThNHX1基因长1761bp，运用NCBI的ORFFinder查询软件得出最长编码区1635bp，编码545个氨基酸，与已知的拟南芥的Na+/H+逆向转运蛋白（GenBank登记号：NM122597）具有94.4%的相似性，和其他植物的Na+/H+逆向转运蛋白也有比较高的相似性。4.采用常规分子克隆技术，成功的剔除双元植物表达载体pCAMBIA1301中的筛选标记基因，并成功剔除其中的潮霉素筛选标记基因，构建了无筛选标记基因的植物表达载体pCAMBIA1301-NOhyg。并利用已克隆好的PMD18T-CBF3与PMD18T-ThNHX1酶切连接，构建共转化表达载体pCAMBIA1301-NOhyg-CBF3与pCAMBIA1301-NOhyg-ThNHX1，正转化农杆菌LBA4404转化烟草，以期获得转基因植株。