四纹豆象与花生豆象、菜豆象、鹰嘴豆象、绿豆象、咖啡豆象形态特征相似,菜豆象、四纹豆象、鹰嘴豆象、花生豆象、咖啡豆象已被国家列为禁止进境的检疫性有害生物,绿豆象是中俄、中南植检植保双边协定中规定的检疫性害虫,六种豆象的经济意义均十分重要,口岸检验检疫部门主要以成虫的外部形态特征作为主要鉴定依据。另外,口岸截获的不单是成虫,经常还有些是卵、幼虫、蛹等未成熟虫态,寻找一种正确、快速的鉴定方法在口岸检验检疫中的应用具有十分重要的指导意义。本研究对象为四纹豆象,首先提取四纹豆象的线粒体基因,通过设计引物,对四纹豆象等六种豆象的线粒体特异性基因Co1进行提取,测序,通过构建系统发育树,完成检疫性豆象类的分子鉴定,然后进一步对四纹豆象进行线粒体基因组全序列的测定与分析。将有利于建立更稳健的系统发育关系。实验结果如下:(1)试验方法的优化:由于常规检验豆象的方法不能够准确快速地鉴定出豆象的种类的限制,对临沂出入境检验检疫局截获的豆象以及泰安粮食市场沉积储藏物(豆类)中的豆象,用PCR级柱式动物线粒体DNAout试剂盒处理,对其线粒体DNA中特异性基因Co1进行提取鉴定测序。(2)Co1基因全长420bp,Blast对比分析六种豆象Co1基因的差异。(3)以六种实验材料豆象特异性基因Co1序列为基础,结合GenBank上查找的不同豆象的特异性Co1序列构建系统发育树,加以分析,了解不同豆象的亲缘差异,尝试构建参照体系,方便对截获的豆象及幼虫卵等通过分子测序确定其所属种。(4)验证:通过截获检疫性豆象卵若成虫等个体进行分子水平的鉴定及测序代入系统发育树,经比对确认所属种,完成测序。