胚胎神经干细胞移植防治骨骼肌失神经萎缩的实验研究

来源 :复旦大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:wuliaoaiaia
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周围神经损伤以后,骨骼肌由于丧失支配神经的营养支持而迅速发生萎缩,同时由于周围神经再生速度较慢,在骨骼肌重新获得神经支配以前,往往已经发生不可逆萎缩,严重影响肢体功能的恢复。在目前尚无有效方法促进周围神经生长速度的情况下,积极探讨骨骼肌失神经萎缩的机制及其防治措施,无疑具有重要的意义。近年来的研究证明,神经干细胞具有良好的组织相容性和多向分化潜能,体内移植后对神经系统损伤和疾病均具有一定的修复作用。本课题以大鼠坐骨神经损伤为实验动物模型,较为系统地探讨了胚胎神经干细胞体内外增殖分化的特点,并对神经干细胞移植防治骨骼肌失神经萎缩、修复骨骼肌运动功能的治疗效果进行评价,以期为临床防治骨骼肌失神经萎缩、恢复骨骼肌运动功能提供新的思路和方法。第一部分 胚胎大鼠脊髓神经干细胞体外培养和分化的研究目的:探讨脊髓来源神经干细胞的分离培养方法、增殖特点及其多向分化特性。方法:取胚胎14-16天SD大鼠脊髓组织,采用机械分离法获得神经干细胞,并应用无血清神经元限定性培养基进行原代和传代培养,对培养的神经干细胞进行单克隆纯化,然后进行Nestin(巢蛋白)免疫组织化学鉴定;将获得的神经干细胞进行体外分化,对分化结果进行NF(神经丝蛋白)和GFAP(胶质原纤维酸性蛋白)免疫组织化学鉴定。在神经干细胞增殖和分化过程中,进行细胞形态学观察。结果:采用机械分离法和无血清培养法可获得大量的神经干细胞,体外培养达两个月之久仍能保持增殖活性,单克隆培养可获得神经干细胞球,对其进行Nestin免疫细胞鉴定为阳性,证明为神经干细胞;神经干细胞体外分化可获得各种神经终末细胞,NF和GFAP鉴定结果为阳性,证明可分化为神经元和神经胶质细胞。结论:应用无血清神经元限定性培养基可从胚胎脊髓组织中分离并获得大量的神经干细胞,这些神经干细胞具有多向分化潜能,能够分化为神经元等多种神经终末细胞。
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