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胆管肿瘤细胞生物学行为相关基因的研究是胆管癌基础研究的重点。前一小组mRNA差异显示方法获得差异表达的cDNA L2片段序列资料,长度为182bp。利用基因组序列,设计实验对该片段所在基因进行克隆及相关研究。 利用解放军总医院肝胆外科2000年收集26例胆道肿瘤患者的手术标本:其中肝内胆管癌标本共计4例,肝门胆管癌6例,肝外胆管癌标本7例,壶腹癌4例,此外尚有5例其他病变的标本,初步建立胆道肿瘤新鲜组织标本库。选取少部分进行总RNA提取。 将L2(P1P2)片段进行克隆保存,得到序列Seq4-ex 硕士学位论文 胆管癌相关新基因CCR-LZ/FXYD6克隆、鉴定、电子定位分析和表达的 初步研究 与原序列(在设计引物 PI PZ跨越区)完全吻合,可供进 一步利用。 首次根据基因组序列与LZ 间联系,发现LZ与o UnigeneFXYD6高度同源。设计两对引物(P3P4和PSP6), 其中PSP6成功扩增出CDNA产物,并进行克隆、测序鉴 定。序列比较证实序列WTS 为LZ 外延序列 (CCR-LZ/FXYD6)基因的大片段。 RT-PCR法检测CCR-LZ/FXYD6基因的大片段(序列 WTS)在胆管患者中存在表达差异:在肿瘤组织中高表 达,而在正常组织中不表达或低表达。 通过序列土较,对 LZ、Seg4、WTS及 Unigene FXYD6 在基因组进行电于定位,发现 LZ为 门 号染色体长臂 (if)反意链上片段,而其它序列均为氨基酸编码序列 顺序排列。其中 FI 677与基因组序列存在较大差异。’对胆管癌相关新基因CCRLZ/FXYD6的完整序列和 功能研究尚需深入。