近年来,全球水产养殖快速发展,养殖方式不断向高效、集约化的方向发展,这种养殖方式导致水产病害问题日益严重。细菌、病毒、真菌和寄生虫等带来的传染性疾病严重制约了水产养殖业的发展,给水产养殖业带来巨大的经济损失。为了解决水产疾病问题,人们不断加大抗生素的使用量,造成耐药微生物不断涌现,同时也带来食品安全问题,威胁人类健康以及环境友好型水产养殖发展。因此,高效环保的病害防控技术研究日益受到关注。对于鱼类养殖而言,发病期经常发生在幼鱼期,难以防治,易造成大量幼鱼死亡,经济损失巨大。疫苗免疫接种策略对于保护鱼类免受疾病感染最为有效和安全,受到各个国家的重视,但目前并没有简易有效的疫苗满足市场需求。同时,免疫途径也是鱼类免疫的瓶颈性难题,只有研制出有效的口服疫苗才会有产业化应用价值。本研究针对石斑鱼最常见的细菌性病原副溶血弧菌和危害最为严重的病毒性病原神经坏死病毒,分别构建重组表达其主要抗原副溶血弧菌外膜蛋白(vpOMPK)和神经坏死病毒衣壳蛋白(gNNVmcp)的表达载体pET-28a-vpOmpK和pET-SUMO-gNNVmcp,通过高密度发酵大量表达制备包涵体抗原。包涵体粒径约800nm,具有较强的耐酸碱性,在pH在1-12范围的溶液中包涵体均未出现明显的分解。本研究也制作了副溶血弧菌和哈维氏弧菌的福尔马林灭活疫苗。将灭活弧菌和包涵体蛋白以不同的浓度组合制作成6种实验饲料。采用杂交石斑鱼虎龙杂交斑(Epinephelus fuscogutatus♀×Epinephelus lanceolatus♂)的幼鱼测试疫苗的免疫效果。本研究共设置六组进行疫苗效果测试,第一组:空白组(control);第二组:灭活弧菌实验组(Vph);第三组:灭活弧菌+低剂量包涵体组(Vph+IB-l);第四组:灭活弧菌+高剂量包涵体组(Vph+IB-h);第五组:低剂量包涵体组(IB-l);第六组:高剂量包涵体组(IB-h)。通过鱼体口服免疫实验后,对石斑鱼不同免疫器官中相关免疫基因进行实时荧光定量PCR检测发现,在后肠中,Vph+IB-h疫苗组igm表达量显著上调;在血细胞中,Vph疫苗组igm表达量显著上调,Vph+IB-h组igd表达量有显著上调;在头肾中,Vph免疫组的il-1β的表达量相对于其他组显著上调,IB-l和IB-h免疫组也同样具有上调趋势,但并没有显著性差异;头肾中tnf-α在IB-h组显著性上调。使用包涵体与血清共孵育,提取血清中能与包涵体结合的蛋白,通过质谱分析,在Vph+IB-h实验组和IB-l实验组中鉴定到相对较多的免疫球蛋白。以上实验结果表明,包涵体口服疫苗能够引起免疫球蛋白基因和免疫相关基因的上调,有望成为新一代鱼类免疫疫苗。