【摘 要】
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目的 探讨雷公藤多苷对卵巢颗粒细胞的损伤机制以及枸杞多糖对该损伤的减毒机制,为临床雷公藤多苷的合理应用提供实验依据。方法 体外培养SVOG细胞,用不同浓度的雷公藤多苷和枸杞多糖作用于SVOG细胞,采用CCK8法检测两种药物的不同浓度对细胞增殖活力的影响,筛选出雷公藤多苷的损伤浓度及枸杞多糖干预浓度。将细胞分为对照组,损伤组（雷公藤多苷组）及干预组（雷公藤多苷+枸杞多糖组）,分别给予相应药物作用,显
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目的 探讨雷公藤多苷对卵巢颗粒细胞的损伤机制以及枸杞多糖对该损伤的减毒机制,为临床雷公藤多苷的合理应用提供实验依据。方法 体外培养SVOG细胞,用不同浓度的雷公藤多苷和枸杞多糖作用于SVOG细胞,采用CCK8法检测两种药物的不同浓度对细胞增殖活力的影响,筛选出雷公藤多苷的损伤浓度及枸杞多糖干预浓度。将细胞分为对照组,损伤组（雷公藤多苷组）及干预组（雷公藤多苷+枸杞多糖组）,分别给予相应药物作用,显微镜下观察药物对细胞形态学的影响;ELISA法检测AMH浓度;流式细胞仪分析细胞凋亡率;JC-1荧光观测法和流式细胞术检测线粒体膜电位的变化;免疫印迹法检测线粒体途径凋亡相关蛋白Cyt-C、Caspase3、Caspase9、Bcl-2、Bax 与 PGC-1α 蛋白的表达。结果1.采用CCK8法检测雷公藤多苷、枸杞多糖和枸杞多糖对雷公藤多苷诱导后细胞存活率的影响不同浓度雷公藤多苷诱导SVOG细胞24h后,细胞存活率随雷公藤多苷浓度的升高而下降,呈现浓度依赖性下降;200 μg/ml以内浓度的枸杞多糖对细胞的增殖无显著影响,400 μg/ml枸杞多糖能够促进细胞增殖,提高细胞活力,800 μg/ml枸杞多糖使细胞存活率降低;枸杞多糖能够提高雷公藤多苷诱导后细胞的活力,促进SVOG细胞的增殖,在200 μg/ml以内浓度范围内,其作用强度随枸杞多糖浓度升高而加强,存在一定量效联性。2.细胞形态学变化显微镜下观察,损伤组细胞出现固缩变圆、间隙增大,存活细胞明显减少,伴有坏死、脱落漂浮的细胞数量增多;干预组细胞状态较损伤组明显改善。3.AMH浓度变化雷公藤多苷损伤组与对照组比较,能够显著降低培养液中AMH浓度（P＜0.05）;与损伤组比较,枸杞多糖能够减轻雷公藤多苷对细胞AMH分泌的影响,提高AMH浓度（P＜0.05）。4.流式细胞凋亡率的检测雷公藤多苷能够提高细胞凋亡率,加速SVOG细胞凋亡;与损伤组比较,枸杞多糖可降低雷公藤多苷对细胞凋亡率的影响,减缓细胞凋亡速度（P＜0.05）。5.线粒体膜电位的变化JC-1荧光观测,对照组细胞线粒体膜电位高,呈红色荧光;经雷公藤多苷诱导后SVOG细胞绿色荧光较对照组增强,JC-1流式分析损伤组线粒体膜电位较对照组降低（P＜0.05）;与损伤组比较,荧光观测干预组绿色荧光较损伤组强度减弱,流式分析膜电位较雷公藤多苷损伤后升高,表明枸杞多糖能提高部分下降的膜电位（P＜0.05）。6.免疫印迹法检测蛋白表达SVOG细胞在雷公藤多苷作用后,促凋亡蛋白Cyt-C、Caspase3、Caspase9、Bax表达水平较对照组显著上调,PGC-1α与抗凋亡蛋白Bcl-2与对照组比较显著下调（P均＜0.05）;与雷公藤多苷损伤组比较,干预组细胞在枸杞多糖的作用下下调凋亡蛋白Cyt-C、Caspase3、Caspase9、Bax的表达量,上调PGC-1α、Bcl-2表达量（P均＜0.05）。结论1.雷公藤多苷能够抑制SVOG细胞增殖,降低细胞线粒体膜电位,损伤线粒体功能,提高细胞凋亡率,上调促凋亡蛋白Cyt-C、Caspase3、Caspase9、Bax表达,下调PGC-1α、Bcl-2蛋白表达,加速细胞凋亡进程。雷公藤多苷对卵巢颗粒细胞的毒性损伤机制与线粒体功能损伤相关,通过激活线粒体凋亡途径,诱导细胞凋亡。2.枸杞多糖能够拮抗雷公藤多苷对卵巢颗粒细胞的损伤。
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