论文部分内容阅读
背景与目的哮喘是当今世界最常见的慢性疾病之一。近20年来,哮喘发病率和死亡率持续增加,目前仍以每10年20%-50%的比例增长。哮喘是一种气道慢性炎症性疾病,其发生与发展主要由遗传因素与环境因素相互作用的结果,遗传因素对哮喘的相对作用为36～79%。目前国内、外学者通过对人群哮喘相关基因筛选定位及其多态性的研究,结果发现与人类哮喘有关的候选基因有261个,分布在22对常染色体和1对性染色体上,涉及的基因及单核苷酸多态性(SNPs)众多,国内外对相关基因的研究结果多有不一。Moffatt等人发表于自然期刊(Nature)的哮喘基因组相关研究(genome-wide associaton, GWAS)发现血清类粘蛋白1样蛋白3(ORMDL3)基因是哮喘的易感基因,rs7216389基因型的多型性(polymorphism)与儿童哮喘的发作有关。目前国内关于该基因位点单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism, SNP)的相关研究报道较少,迄今未见宁波地区的相关报道。本项目拟采用聚合酶链反应以及DNA测序方法,分析宁波地区哮喘儿童ORMDL3基因的SNPs,以期能够明确该基因与宁波地区儿童哮喘发病的关联性。主要是ORMDL3基因中rs7216389、rs4378650以及rs11650680位点SNPs与宁波地区儿童哮喘发病的关联性。希望能够进一步推动宁波地区儿童哮喘的防治。材料与方法从2011年10月到2012年10月共收集在宁波市北仑区人民医院就诊的儿童哮喘患者150例,符合((2008中国儿童哮喘指南》临床诊断标准,包括初次诊断以及复诊病例,均为宁波本地人口。其中男性82例,女性68例,平均年龄6.6±1.7岁。同期收集当时在宁波北仑区人民医院住院的非呼吸道疾病患儿,排除既往有反复咳嗽、喘息病史的患儿,均为宁波本地人口,作为对照组,共150例,其中男性80例,女性70例,平均年龄7.54-1.3岁。由监护人签署知情同意书,并报告医院伦理委员会备案。采集血液标本,应用DNA抽提试剂盒提取实验对象的基因组,采用聚合酶链反应(PCR)技术以及DNA测序方法对150例儿童哮喘患者ORMDL3基因多态性进行观察,并与150例对照组进行对比。对两组ORMDL3基因中rs7216389、rs4378650以及rs11650680位点等位基因频率、基因型以及等位基因分布频率进行统计学分析比较。本研究主要采用SPSS13.0软件进行分析。按照Hardy-Weiberg平衡法检测样本的群体代表性。组间基因型及等位基因频率等技术资料采用卡方检验,P<0.05为统计学有差异。结果1.哮喘组和对照组之间的性别、年龄无统计学差异,具有可比性。2.哮喘组和对照组之间ORMDL3基因中rs7216389位存在三种基因型,即TT,TC和CC.ORMDL3基因rs7216389位点各基因型频率在哮喘组和对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。进一步分析发现,ORMDL3基因rs7216389位点C和T等位基因分布频率存在显著性差异(P<0.05)。3.哮喘组和对照组之间ORMDL3基因中rs4378650位点存在三种基因型TT,TC,CC,哮喘组合对照组相比,ORMDL3基因rs4378650位点基因型分布频率存在统计学差异(P<0.05)。并且此位点等位基因C和T的分布频率存在显著性差异(P<0.05)。4.哮喘组和对照组之间ORMDL3基因中rs11650680位均存在TT,TC和CC三种基因型。哮喘组和对照组相比,ORMDL3基因rs11650680位点基因型分布频率存在统计学差异(P<0.05)。此外,rs11650680位点C和T等位基因分布频率存在显著性差异(P<0.05)。结论ORMDL3基因中rs7216389、rs4378650以及rs11650680位点具有单核苷酸多态性(SNPs),其位点多态性与宁波地区儿童哮喘的发病有相关性。