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目的:1.通过临床试验研究补肾强筋胶囊治疗肝肾不足、筋脉瘀滞型绝经后膝骨关节炎的有效性及不良事件发生情况,为临床运用该补肾活血方治疗绝经后膝骨关节炎提供依据。2.通过动物实验研究补肾强筋胶囊对去卵巢膝骨关节炎大鼠软骨形态学的影响以及对ERα/miR-140通路及软骨代谢相关基因和蛋白表达的作用,探讨该补肾活血方对绝经后膝骨关节炎的作用机理。方法:1.临床试验选择2019年1月—2019年12月在广东省第二中医院骨科门诊就诊的证型为肝肾亏虚、筋脉阏滞型的绝经后膝骨关节炎患者60例,随机分组为试验组和对照组各30例。试验组及对照组均予以塞来昔布胶囊口服,试验组在对照组基础上口服补肾强筋胶囊。在口服药物的基础上均对两组患者进行功能锻炼的指导,疗程均为4周。分别记录两组患者治疗前、治疗2周、治疗4周的VAS评分、WOMAC评分,治疗前、治疗4周后的Lequesne指数、本体感觉,在治疗4周后进行中医证候疗效评定,记录研究过程发生的不良事件发生情况,对补肾强筋胶囊治疗绝经后膝骨关节炎的有效性以及不良事件发生情况进行综合评价。2.动物实验将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、补肾活血组、来曲唑组以及来曲唑+补肾活血组,除空白组外,其余各组大鼠均进行去卵巢KOA造模,并进行药物干预,空白组与模型组每天予0.1ml/10g生理盐水,其余各组剂量参照:来曲唑(0.5 mg·kg-1)和补肾强筋胶囊(剂量为0.243g生药·kg-1),均按照人推荐剂量进行等效换算;给予持续6周,每日1次。给药6周后处死大鼠,收集各组大鼠血清和膝关节软骨组织进行相关检测。制作病理切片,用HE染色、番红-固绿染色来观察各组大鼠关节组织结构的改变,并进行改良Mankin评分;采用ELISA检测大鼠血清E2及CTX-Ⅱ水平;通过 RT-qPCR 检测 18S、miR-140-5p、ERα、Aggrecan、COL2Al、ADAMTS-5,MMP-13基因表达水平;用Western blot检测大鼠膝关节软骨组织ER α、Aggrecan、COL2A1、ADAMTS-5、MMP-13蛋白表达水平。结果:1.临床研究VAS评分:组间比较,两组VAS评分治疗前无显著性差异(P＞0.05),与对照组比较,试验组VAS评分在治疗2周、治疗4周均有显著性差异(P<0.05),试验组在改善VAS评分方面优于对照组;组内比较,与治疗前比较,试验组和对照组VAS评分在治疗2周、4周均有显著性差异(P<0.05)。WOMAC评分:组间比较,两组WOMAC疼痛评分、僵硬评分、活动功能评分以及总评分治疗前均无显著性差异(P>0.05);与对照组比较,试验组WOMAC疼痛评分、活动功能评分以及总评分在治疗2周、治疗4周均有显著性差异(P<0.05)、试验组WOMAC僵硬评分在治疗4周有显著性差异(P<0.05),治疗4周试验组在改善WOMAC评分方面优于对照组;组内比较,与治疗前比较,试验组和对照组WOMAC疼痛评分、僵硬评分、活动功能评分以及总评分均有显著性差异(P<0.05)。Lequesne指数:组间对比,两组Lequesne指数治疗前无显著性差异((P＞0.05)),治疗4周后,试验组Lequesne指数改善情况优于对照组(P<0.05);组内对比,与治疗前相比,试验组和对照组Lequesne指数在治疗4周后均有显著性差异(P＜0.05);中医证候疗效:治疗4周后,试验组的有效率为93.5%,对照组的总有效率为90.0%,试验组中医证候疗效优于对照组(P<0.05)。本体感觉评估:组间对比,两组治疗前本体感觉无显著性差异(P＞0.05),治疗4周后,两组本体感觉无显著性差异(P＞0.05);组内比较,与治疗前相比,试验组和对照组本体感觉在治疗4周后均有显著性差异(P<0.05)。不良事件:两组治疗过程中不良事件发生率均较低,试验组为2/30,对照组为2/30。2.动物实验经过6周灌胃和喂养后,各组大鼠膝关节软骨组织HE染色、番红-固绿染色,结果显示,来曲唑组软骨组织退变程度最重、模型组次之,补肾活血组病变程度较模型组减轻,来曲唑+补肾活血组较来曲唑组减轻;改良Mankin评分结果显示,模型组评分显著高于空白组(P<0.05),补肾活血组显著低于模型组(P<0.05)。ELISA结果显示,模型组大鼠血清中E2水平显著低于空白组(P<0.05),补肾活血组E2水平显著高于模型组(P＜0.05);模型组大鼠血清中CTX-Ⅱ水平显著高于空白组(P<0.05),补肾活血组CTX-Ⅱ水平显著低于模型组(P＜0.05);来曲唑+补肾活血组CTX-Ⅱ水平显著低于来曲唑组(P<0.05)。RT-qPCR结果显示,与空白组相比,模型组miR-140-5p,ERα,Aggrecan,COL2A1 mRNA表达量显著下降(P<0.05),ADAMTS-5,MMP-13 mRNA表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,补肾活血组miR-140-5p,ERα,Aggrecan,COL2Al mRNA表达量显著升高(P<0.05),ADAMTS-5,MMP-13 mRNA表达显著下降(P<0.05);与来曲唑组相比,来曲唑+补肾活血组miR-140-5p,ERα,Aggrecan,COL2A1 mRNA表达量显著升高(P<0.05),ADAMTS-5,MMP-13 mRNA表达显著下降(P<0.05)。Western blot结果显示,与空白组相比,模型组ER α,Aggrecan,COL2A1蛋白表达显著下降(P<0.05),ADAMTS-5,MMP-13蛋白表达显著升高(P＜0.05);与模型组相比,补肾活血组ERα,Aggrecan,COL2A1蛋白表达显著升高(P<0.05),ADAMTS-5,MMP-13蛋白表达显著下降(P<0.05);与来曲唑组相比,来曲唑+补肾活血组ERα,Aggrecan,COL2A1蛋白表达显著升高(P＜0.05),ADAMTS-5,MMP-13蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论:1.临床研究部分补肾强筋胶囊可以有效减轻肝肾亏虚、筋脉瘀滞型绝经后KOA患者的疼痛(VAS评分与WOMAC疼痛评分)、僵硬(WOMAC僵硬评分),并且改善活动功能(WOMAC功能指数)及关节炎严重程度(Lequesn指数);具有良好的中医证候疗效,其不良事件发生率低。2.动物实验部分补肾强筋胶囊可以显著提高去卵巢KOA大鼠血清中E2水平、降低CTX-Ⅱ水平,提高去卵巢KOA大鼠软骨组织miR-140-5p、ERα、Aggrecan、COL2A1基因或蛋白表达,下调ADAMTS-5,MMP-13基因或蛋白表达。其可能通过激活ERα/miR-140通路,调节软骨代谢,从而发挥保护软骨的作用。