论文部分内容阅读
目的:探讨肾移植术后新发供者特异性抗体(DSA)的危险因素。探讨Tfh细胞数量、Tfh/Treg比例失衡与肾移植术后新发DSA的关系,为预防和治疗新发DSA提供新的策略。方法:入选2013年1月1日到2013年12月31日在我院行肾移植,术后能在我院常规随访的218名肾移植患者,随访3年,收集临床资料。采用免疫磁珠荧光液相芯片(Luminex)技术检测肾移植术后3、6、12、24、36个月血清中DSA抗体以及C1q+DSA。分析新发DSA的发生率、产生时间、抗体特征以及对移植肾存活的影响。分析补体C1q+DSA的特点。根据DSA结果分为DSA阳性组(n=31)和DSA阴性(n=187),采用单因素和多因素分析两组间的临床资料,得出影响新发DSA的危险因素。入选2013年9月至2014年9月在我院行肾移植术患者,入选时术后随访时间均大于1年,根据术后新发DSA情况分为DSA阳性组30例,DSA阴性组30例和健康对照组30例。各组间根据性别、年龄进行匹配。应用流式细胞术检测三组间外周血中淋巴细胞亚群Tfh细胞(CD4+CXCR5+T)、Treg细胞、CD19+CD38+B细胞百分比。应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real time PCR)方法检测三组间外周血单核细胞中转录因子Bcl-6m RNA、Foxp3m RNA、ROR-γt m RNA的表达水平。ELISA方法检测三组患者外周血中细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-17、IL-21、BAFF表达水平。比较三组间Tfh细胞,Treg细胞以及转录因子和细胞因子的差异,分析它们在新发DSA的作用。结果:1、术后新发DSA出现的平均时间为18.7±10.9月,最早为术后3个月,术后1年发生率为9.2%(20/218),术后2年累计发生率12.9%(28/218),术后3年累计发生率为14.2%(31/218)。2、31名DSA阳性患者中共有39个DSA阳性位点,其中Ⅰ类抗体4个,Ⅱ类抗体35个,其中HLA DQ 30个,占76.9%。新发DSA以Ⅱ类抗体为主,尤其以DQ抗体最多。3、C1q+DSA的平均荧光强度值(MFI)大于C1q-DSA的MFI(8478±3676vs 4943±2114,P=0.003)。C1q+DSA患者与C1q-DSA患者相比更易发生抗体介导排斥反应(71.4%vs 20%P=0.007)。4、通过二元Logistic逐步回归模型分析,得出DQ错配(OR:3.870)、环孢素A(OR:3.330)、CNI药物浓度低(OR:2.580)为肾移植术后新发DSA的独立危险因素。5、滤泡辅助性T细胞(Tfh)比例DSA阳性组高于DSA阴性组(8.95±2.01%vs 5.02±1.43%P=0.000)。调节性T细胞(Treg)比例DSA阳性组低于DSA阴性组(2.69±0.77%vs 5.95±1.27%P<0.01),差异有统计学意义。阳性组CD19+CD38+B细胞比例高于DSA阴性组(48.9±7.1%vs 34.5±6.47%P<0.01)。6、Tfh/Treg细胞比值DSA阳性组高于DSA阴性组(3.59±1.41 vs 0.909±0.414P<0.001),DSA阳性组Tfh/Treg比值右移。7、分析转录因子得出DSA阳性组BCL-6 m RNA的表达量明显高于DSA阴性组(2.23±0.40 versus 1.90±0.47,P=0.017)。DSA阴性组Foxp3m RNA表达量显著高于DSA阳性组(1.12±0.17 verse 0.94±1.90 P=0.003)。DSA阳性组Ro Rγt m RNA表达量明显高于DSA阴性组(2.98±0.30 vs 2.65±0.26 P=0.000)。8、细胞因子表达发现DSA阳性组IL-6、IL-17、IL-21、BAFF水平高于DSA阴性组,而IL-10表达DSA阳性组低于DSA阴性组。结论:1、DQ错配、环孢素A、CNI药物浓度低是肾移植术后新发DSA的独立危险因素。2、外周血中转录因子Bcl-6增多,Tfh细胞数量增多,IL-21表达增加是肾移植术后新发DSA的原因。3、Tfh/Treg细胞免疫失衡,Treg细胞对Tfh细胞免疫抑制能力减弱可能参与了新发DSA的产生。4、细胞因子IL-6、IL-17、IL-21、BAFF参与了新发DSA的产生,推测通过阻断这些细胞因子通路可能阻止新发DSA的产生。