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目的:探究中药苦参中总生物碱对人肺腺癌A549细胞株增殖、细胞周期等方面的影响及对其miRNA表达的改变。 方法:A549细胞培养于含有10%灭活血清的DMEM培养液中,在37℃,5%CO2湿度饱和的培养箱中进行培养。用浓度为0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml及2.5mg/ml的苦参总碱分别作用于细胞24小时、48小时、72小时后,以MTT比色法检测苦参总碱对A549细胞增殖的抑制作用;浓度为0.5、1.0、1.5mg/ml苦参总碱分别作用于 A549细胞72小时后,倒置相差显微镜观察 A549细胞的一般形态学变化;Hoechst33258染色后检测细胞凋亡;用流式细胞术(FCM)测定细胞周期,通过蛋白免疫印迹法检测Fas蛋白及VEGF蛋白表达水平的变化;抽取并富集空白组与1.0mg/ml苦参总碱作用72小时后的实验组的miRNA,制作miRNA基因芯片分析实验组与对照组之间miRNA表达谱的差异。 结果:浓度为0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml及2.5mg/ml的苦参总碱分别作用A549细胞24小时后,其抑制率分别为(7.46±0.72)%、(17.68±0.93)%、(25.17±1.13)%、(41.90±3.65)%、(49.05±4.72)%;作用于细胞48小时后,其抑制率分别为(14.02±1.23)%、(40.53±1.06)%、(63.28±1.42)%、(75.46±1.13)%、(78.60±3.31)%,作用于细胞72小时后,其抑制率分别为(16.77±1.11)%、(46.87±1.02)%、(74.80±1.12)%、(84.13±1.46)%、(85.01±3.46)%,各实验组与空白组相比有统计学差异(P<0.05),各实验组之间相比有统计学差异(P<0.05)。浓度为0.5mg/ml、1.0mg/ml及1.5 mg/ml的苦参总碱分别作用细胞72h后,G0/G1期细胞百分比分别为(64.43±0.73)%、(76.00±0.60)%、(79.13±0.72)%,S期细胞的百分比为(26.50±1.25)%、(16.30±0.69)%、(14.10±0.55)%,G2期细胞的百分比为(8.10±0.55)%、(7.61±0.68)%、(6.78±0.50)%,各实验组与空白组相比有统计学差异(P<0.05)。用浓度为0.5mg/ml、1.0mg/ml及1.5 mg/ml的苦参总碱分别作用细胞72小时后,Western blotting结果显示,苦参总碱使Fas蛋白的表达水平提高,VEGF蛋白表达水平降低,且变化均有统计学差异(P<0.05),Fas蛋白灰度值分别为127.37±2.32、206.98±1.17和343.00±2.13,VEGF蛋白灰度值分别为408.15±1.13、256.88±1.65和154.35±1.01。miRNA基因芯片对770个miRNA表达情况的检测结果显示,与空白对照组对比,实验组发生改变的miRNA有64个,其中上调的有59个,下调的有5个。 结论:苦参总碱可抑制人肺腺癌A549细胞株的增殖,其作用机制可能与Fas蛋白表达增高,直接杀伤A549细胞、及引起细胞凋亡有关;苦参总碱还可使VEGF蛋白表达降低,从而使 A549细胞的生长、转移受到抑制。此外,苦参总碱能造成A549细胞的miRNA的表达谱发生变化。