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阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)是老年期常见的痴呆类型,临床表现为记忆能力减退、持续性认知能力下降以及运动障碍等,并伴随有一系列精神病症状。病理特征为大脑内形成大量的老年斑(SP)、神经原纤维缠结(NFT)、皮层和海马区神经元丢失。目前,全世界大概有阿尔兹海默病患者2500万,我国有上千万。然而,该病的发病原因仍不清楚,也没有能够改变AD病情的药物出现。根据以往的研究结果提示,淀粉样蛋白-β(Aβ)在AD的发病机制中起重要作用,也作为主要的治疗靶点。目前,经FDA批准的用于治疗AD的药物可分为两类,一类为胆碱酯酶抑制剂,另一类为NMDA受体拮抗剂。然而,这两类药物只能缓解症状,还不能有效的逆转AD患者脑内老年斑沉积和神经原纤维缠结等病理改变,即只能指标不能治本。鉴于AD发病机制的复杂性,提出的治疗原则为:在发病前期,目标为防止Aβ产生,保护突触功能,抑制tau蛋白过度磷酸化;在轻度认知受损阶段,目标为去除Aβ斑块,保护神经元和突触功能,降低tau蛋白过度磷酸化;在痴呆阶段,目标为解决Aβ沉淀,突触功能障碍,tau过度磷酸化,神经炎症和氧化应激等问题,以及提供神经保护和认知训练。环氧化二十碳三烯酸(EET)是一种内源性的心血管活性物质,目前发现有多方面的作用,包括舒张肾脏、肠道、脑循环的血管,调节平滑肌细胞的迁移、前列腺素E2产生和芳香酶活性,抑制血小板凝集,在内皮细胞,EET还可以抑制细胞因子诱导的炎症反应,增加钙内流,刺激血管形成。环氧化水解酶(sEH)是EET的主要代谢酶,可以水解EET为DHET。鉴于EET在体内的多方面作用,sEH抑制剂受到越来越广泛的关注。加之sEH抑制剂的使用相对简单,因而具有一定的临床应用前景。小胶质细胞(microglia,MG)是中枢神经系统的免疫效应器,当脑损伤后表现为激活状态,激活态的小胶质细胞可分为具有促炎作用的M1期和具有抗炎作用的M2期。M1期小胶质细胞可分泌炎性因子如IL-1β、TNF-α、活性氧自由基和活性氮,M2期小胶质细胞具有抗炎的作用,可以分泌神经保护因子如IGF-1、GDNF和BDNF等。综上所述,我们设想:sEH抑制剂TPPU通过增加脑内M2期小胶质细胞的数量,减少M1期小胶质细胞的数量,从而增加了了激活态小胶质细胞的吞噬能力,进而达到治疗AD的作用。第一、本课题组已经对引进的5×FAD转基因小鼠(Tg6799)进行基因鉴定、斑块染色、Aβ免疫组化染色和行为学检测。发现小鼠从两个半月开始,皮层和海马区出现斑块,随月份增加,斑块数量增加,基因鉴定结果与斑块染色、Aβ免疫组化染色结果相符。六臂水迷宫行为学检测发现,5×FAD转基因小鼠组进入非目的臂的次数即错误次数明显高于WT组,说明5×FAD转基因小鼠学习记忆能力已经受损。第二,行为学检测。选取3月龄5×FAD转基因雄性小鼠16只,随机分为两组,一组腹腔注射TPPU,另外一组腹腔注射vehicle,连续给药一周,每天给药一次,第八天行水迷宫检测。发现给予TPPU处理组寻找平台潜伏期的平均时间明显低于vehicle组,第五天待在目标象限的时间百分比与穿越平台的次数明显高于vehicle组(均数比较采取重复测量的方差分析,Mauchly球形检验:p=0.053,不拒绝球形假设,无需进行校正;组间比较:F=16.35,p=0.0012,两组间差别有统计学意义)。说明TPPU可拯救AD小鼠的学习记忆能力。第三,斑块数量的比较。选取3月龄5×FAD转基因雄性小鼠16只,随机分为两组,一组腹腔注射TPPU,另外一组腹腔注射vehicle,连续给药一周,每天给药一次,切片,thioflavin S染色,计算两组间皮层与海马区斑块数量,TPPU组小鼠皮层和海马区的斑块数量明显低于vehicle组。(n=8,皮层区:TPPU组63.11±7.03,vehicle 组 22.56±4.35,p=0.0003;海马区:TPPU 组 59.08±6.99;vehicle组18.52±4.34,p=0.0002),(n=8,斑块面积占总面积的比例,皮层区:TPPU组0.30±0.05,vehicle 组 0.66±0.07,p=0.0008;海马区:TPPU 组 0.28±0.04,vehicle组0.74±0.05,p<0.0001)说明TPPU可减少脑内斑块数量。第四、观察小胶质细胞与斑块和小胶质细胞与Aβ的关系。选取3月龄5×FAD转基因雄性小鼠16只,随机分为两组,一组腹腔注射TPPU,另外一组腹腔注射vehicle,连续给药一周,每天给药一次。对斑块进行染色发现,给予TPPU处理组:激活态小胶质细胞数量明显增多,小胶质细胞聚集在斑块周围,斑块数量与面积明显缩小;对Aβ进行染色发现:大部分小胶质细胞与Aβ共染,说明小胶质细胞正在吞噬Aβ。说明TPPU可促进小胶质细胞吞噬Aβ,从而减少斑块数量。第五、激活态小胶质细胞M1/M2期的观察。选取3月龄5×FAD转基因雄性小鼠10只,随机分为两组,一组腹腔注射TPPU,另外一组腹腔注射vehicle,连续给药一周,每天给药一次。第八天对皮层及海马区取样,进行Q-PCR检测。发现TPPU组小鼠脑内M2期小胶质细胞增多,M1期小胶质细胞减少。以上结果表明,sEH抑制剂TPPU可以促进脑内M2期小胶质细胞增多,M1期小胶质细胞减少,增加了小胶质细胞的吞噬能力,从而达到清除Aβ,治疗AD的目的。