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目的 构建突变人CD59的真核表达系统，获得高效表达突变人CD59的CHO细胞株，并进行糖化和非糖化突变人CD59蛋白功能的检测，探讨CD59作为补体攻膜复合体抑制物在糖尿病血管并发症病理机制中的重要作用，为人类糖尿病血管增殖症的发病机理提供依据。 方法 突变人CD59的真核细胞表达系统的建立：将含有突变人CD59的重组PALTER-MAX质粒与PcDNA运用阳离子脂质体介导法共转染入CHO细胞；用新霉素类似物(G418)筛选出阳性克隆，并用流式细胞术进一步筛选出高效表达克隆，建立稳定高效表达CHO细胞株。应用免疫组化方法、免疫荧光技术进一步鉴定稳定高效表达CHO细胞株；裂解细胞，应用SDS—PAGE凝胶电泳技术、免疫印迹技术、固相酶联免疫吸附试验验证稳定高效表达阳性细胞CD59的表达；高糖培养稳定高效表达阳性细胞，并运用BCECF染料释放试验研究糖化和非糖化突变人CD59的抗补体活性。 结果 成功构建突变人CD59的真核细胞表达系统：运用阳离子脂质体介导法将含有突变人CD59的PALTER—MAX重组质粒与PCDNA共转染入CHO细胞：用含有400ug／mlG418的F12培养基培养14天，筛选出稳定阳性表达克隆，RPMI1640培养基扩增获得稳定表达细胞株，并用流式细胞术进一步筛选出高效表达细胞株分别命名为PALTER—CD59—CH01、PALTER—CD59—CH02，表达率分别为53.7％、54.5％；应用免疫组化方法、免疫荧光技术进一步鉴定阳性细胞株；RPMI1640培养基大量扩增PALTER—CD59—CH01、PALTER—CD59—CH02细胞株，裂解细胞得到CD59蛋白质；通过SDS—PAGE凝胶电泳技术、免疫印迹技术、固相酶联免疫吸附试验验证了这两 中文摘要个阳性细胞株CO59蛋白的高效表达;50mM核糖培养72小时，获得突变人CD59糖化细胞株，BCECF染料释放试验结果显示，PALTER一CD59一CHOI、pALTER一CD59一CHOZ细胞较PALTER一CHO细胞染料释放率低，未糖化PALTER一CD59一CHOI、PALTER一CD59一CHOZ细胞比较糖化后细胞染料释放率低。结论 1.构建突变人CD59明1、HMZ的真核细胞表达系统，获得稳定高效表达突变人CD59的CHO细胞株。 2.初步证实了突变人CD59的抗补体活性功能及糖化后抗补体活性的功能下降。 证实了CD59作为一种补体溶解抑制因子在抗补体作用的过程中起着重要的作用;高糖使CD59糖化导致活性下降，可能导致或加速糖尿病血管并发症的发生，为糖尿病血管增殖症病理机制提供实验依据。