论文部分内容阅读
目的:研究骨形成蛋白-4(BMP-4)在小鼠急性胰腺炎AP、慢性胰腺炎CP和人的胰腺癌组织及胰腺癌细胞中的分子表达情况,探讨其在胰腺炎和胰腺癌中的临床相关性及其作用机制方法:采用腹腔注射雨蛙肽的造模方法,AP组和CP组分别于造模第2天20h和6周后摘眼球取血,分离血清,并行腹腔麻醉,提取胰腺组织固定、石蜡包埋。再对胰腺组织进行病理学评分、纤维化程度评估和血清淀粉酶活性测定来评估炎症模型的建立;应用免疫组化的方法观察BMP-4在急慢性炎症下腺泡和导管系统中(包括PDGs)的表达变化;应用外源性BMP-4刺激HPDE和Miapaca2细胞行CCK8增值实验和细胞迁移/侵袭实验,并设立阳性对照组TGF-β,观察外源性BMP-4刺激下细胞学功能表现;应用western blot法检测胰腺癌细胞系与正常细胞系的表达差异,并利用公开数据库收集病例进行BMP-4相关的生存分析,探讨其对预后的影响。结果:AP组淀粉酶活性较对照组明显升高(11685.83±563.84 vs 3562.16±365.71,P<0.05),而CP组淀粉酶活性较对照组显著降低(2560.50±374.69 vs3562.16±365.71,P<0.05);AP组腺泡水肿、部分腺泡坏死、组织充血、炎症细胞浸润;CP组腺泡萎缩、间质纤维化,AP和CP组病理学评分分别为:3.33±0.52和8.50±0.55,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);CP组天狼猩红染色阳性面积较对照组明显增加((19.2±2.86)%vs(9.20±1.76)%,P<0.05),CP组的胶原纤维含量较正常组明显升高,主要分布于胰腺导管及血管周围,并出现明显的小叶间及腺泡间胶原沉积;对照组BMP-4主要在腺泡细胞的胞质中表达,细胞核中几乎无表达,胰腺导管几乎无表达;在炎症刺激下,AP组的腺泡细胞中BMP-4的阳性表达面积较正常组稍降低,但胰管细胞中出现明显的染色强阳性,HIS评分明显高于对照组(P<0.05);CP组中的萎缩腺体BMP-4表达较正常组显著减少,而胰腺导管系统细胞中BMP-4的表达较正常组明显升高,HIS评分明显高于对照组(P<0.05)。在胰腺导管系统中PDGs是胰腺导管的干细胞巢,是导管上皮修复的重要结构,在炎症刺激下,PDGs结构明显增多,且高表达BMP-4;在BMP-4刺激下HPDE和Miapaca2细胞的增殖能力较对照组明显增强(P<0.05),但并没有发现对BMP-4的计量依耐性,而Miapaca2的增殖对BMP-4呈现出明显的计量依耐性,在BMP-4浓度为100ng/ml时,Miapaca2的增值活性便明显升高;在BMP-4刺激组中的HPDE细胞的迁移能力和Miapaca2侵袭能力与TGF-β阳性对照组相似,但较对照组明显增高(P<0.05);研究显示BMP-4在胰腺癌细胞系中的表达普遍较胰腺导管正常上皮细胞(HPDE和HPNE)表达增高(P<0.05);并利用公共数据库TCGA挖掘177例胰腺癌患者预后数据进行KM生存分析发现,胰腺癌患者中BMP-4表达上调,生存分析发现,高表达组的总体生存率较低表达组患者明显降低,高表达组RFS为15.77个月,而低表达组RFS为23.17个月(P<0.05)。结论:炎症刺激下可引起BMP-4在胰腺导管系统中表达明显增加,促进导管系统的细胞增殖与迁移,促进导管上皮的损伤修复;而在胰腺癌中,BMP-4增加胰腺癌细胞的增殖及侵袭能力,有助于肿瘤的进展。