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对虾白斑综合症病毒(WSSV)是制约对虾养殖业发展的最重要因素,因此,WSSV的防治是对虾养殖中的主要问题。众所周知,所有病害的发生和发展都离不开病原体和宿主这两个方面的原因,因此本论文展开了WSSV功能基因、基因表达调控、以及对虾抗病毒免疫等研究,研究结果将为对虾病害的防治提供理论依据。 本论文对病毒wsv477基因进行了鉴定及功能研究,转录时序分析发现该基因在病毒感染4小时开始转录,Western blot鉴定该基因在病毒感染6小时开始翻译,证实wsv477为WSSV的早期基因。通过GTP结合试验证明,WSV477蛋白具有GTP结合活性。在本研究中,发现WSSV vp28基因的引导序列中存在一个内部核糖体进入位点(IRES)序列,通过构建反向突变和缺失突变,发现该IRES只有正向插入才能发挥重新起始翻译的功能,最短长度为180bp,其翻译效率是98.77%。 本论文报道了对虾中一个重要的免疫相关信号转导因子——Ran。GTP结合试验证明Ran蛋白具有GTP结合活性,通过Ran在昆虫细胞中的表达证明Ran蛋白大部分集中在细胞核。Ran基因在对虾所有组织器官中均可被检测到转录和表达,免疫电镜显示Ran蛋白特异分布于肌肉组织的暗带部分。研究结果显示,Ran基因在抗病对虾中上调表达,运用免疫共沉淀等方法,发现肌球蛋白(myosin)与Ran蛋白存在相互作用,进一步研究发现myosin与肌动蛋白(actin)存在相互作用。对虾血细胞吞噬试验证实,Ran蛋白调控吞噬活性。因此,Ran在抗病毒免疫过程中发挥作用的可能途径之一是Ran—myosin-actin-细胞吞噬。比较正常对虾和抗病对虾中Ran基因的序列,结果显示,在抗病虾中Ran基因存在点突变。