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第一部分 Bmi-1对胃癌干细胞样特性的调控及上调miR-34a的机制研究目的：探究Bmi-1对胃癌干细胞样特性的影响并阐明Bmi-1调控miR-34a的机制。方法：采用无血清微球体培养法分离胃癌干细胞样(以下简称干样)细胞并检测干样特性；Western-blot法比较胃癌细胞与微球体中Bmi-1蛋白水平。qRT-PCR检测Bmi-1表达水平对miR-34a表达水平的影响。为进一步探索Bmi-1调控miR-34a表达的机制,首先用双荧光素酶报告基因系统检测Bmi-1对NF-κB转录活性的影响；然后通过ChIP检测NF-K B是否能与miR-34a启动子区结合；最后检测NF-κB抑制剂PDTC对miR-34a表达的影响。结果：胃癌细胞微球体高表达Bmi-1; Bmi-1上调后胃癌细胞形成的微球体数目更多,体积更大。Bmi-1上调后miR-34a表达水平增加。Bmi-1使NF-κB转录活性增强,而NF-κB可以和miR-34a启动子结合从而诱导miR-34a的表达,且NF-κB抑制剂PDTC可以抑制Bmi-1上调所致的miR-34a表达升高。结论：Bmi-1正性调控胃癌细胞干细胞样特性,并且能通过激活NF-κB活性促进miR-34a转录,从而上调miR-34a的表达水平。第二部分miR-34a通过下调Bmi-1负向调控胃癌干细胞样特性目的：探究miR-34a对胃癌细胞干细胞样特性的影响并阐明miR-34a调控Bmi-1的机制。方法：采用无血清微球体培养法、平板克隆形成实验、CCK-8细胞增殖实验、CCK-8细胞毒性实验和Transwell迁移实验检测miR-34a对胃癌细胞干性的影响。Western-blot法检测蛋白水平的改变。结果：miR-34a负性调控胃癌细胞的自我更新、化疗抵抗性和转移潜能。miR-34a上调后可抑制c-myc和Bmi-1的表达水平,而上调c-myc可以上调被miR-34a抑制的Bmi-1表达水平。细胞功能补偿实验表明上调Bmi-1可以逆转miR-34a所导致的胃癌干样特性抑制。结论：miR-34a负性调控胃癌细胞干样特性,并可通过靶向c-myc下调Bmi-1,形成负反馈调节通路；miR-34a可通过调控Bmi-1影响胃癌细胞干样特性。第三部分 miR-34a在胃癌中的表达及与临床预后的关系目的：检测miR-34a及Bmi-1在多个胃癌细胞系中的相对表达水平,检测miR-34a及Bmi-1在胃癌组织及癌旁组织中的相对表达水平并结合临床资料分析其与恶性表型及预后的关系；分析Bmi-1与miR-34a在组织中的表达水平是否相关。方法：通过RT-PCR比较人胃粘膜细胞GES-1与胃癌细胞株AGS、HGC27、MKN28、 MKN45、7901、MGC803的miR-34a表达水平的差异。收集42例胃癌病人癌及癌旁组织并检测Bmi-1及miR-34相对含量,结合临床病理资料分析miR-34a/Bmi-1与恶性表型及预后的关系。分析Bmi-1与miR-34a在组织中的表达水平是否相关。结果：与人胃粘膜细胞GES-1相比,各胃癌细胞中miR-34a均低表达。42例病人癌组织Bmi-1相对表达水平高于癌旁组织；神经侵犯阳性的患者癌组织中Bmi-1表达水平高于阴性的患者；Bmi-1低水平表达患者预后好于高水平表达患者；脉管侵犯或神经侵犯阳性的患者癌组织miR-34a表达水平低于阴性的患者。结论：胃癌细胞株中miR-34a低水平表达；Bmi-1的表达水平与恶性表型、预后具有一定相关性；miR-34a的表达水平与恶性表型具有一定相关性。