目的:制备抗人HE4单克隆抗体,建立基于荧光微球和量子点双信号系统对HE4和CA125联合检测的方法。方法:抗人HE4单克隆抗体的制备和鉴定:(1)重组人WFDC2(HE4)全长蛋白的鉴定与免疫小鼠;(2)杂交瘤细胞的制备及稳定的阳性细胞株的筛选与保存;(3)抗HE4单克隆抗体的制备与鉴定;(4)HE4双抗体夹心ELISA检测方法的条件优化与建立。HE4和CA125联合检测的方法的建立:(1)建立HE4和CA125的双抗体夹心ELISA检测方法,并确定捕获抗体的包被浓度和两种抗原的初步检测范围,为联合检测方法的建立提供初步条件;(2)荧光微球和量子点同HE4和CA125检测抗体的偶联比的优化,同时优化最佳的工作浓度,从而确定联合检测方法的条件;(3)利用建立的联合检测方法检测临床实际血液样本,验证方法的适用性。结果:1、本研究成功筛选到高效价的五株单克隆抗体(7D4、7A4、8G4、4C10、1G8),并且利用配对抗体建立了双抗体夹心ELISA方法,且HE4的检测范围为:0.5-8 ng/m L(20-350 pmol/L)。同时检测临床样本的结果与临床检测结果的总符合率为92%,说明我们制备的抗体有一定的临床应用性。2、本研究建立了检测HE4和CA125的双抗体夹心ELISA方法,其中HE4和CA125的检测范围分别为0.5-10 ng/m L和8-200 U/m L。以ELISA方法为基础,通过相关的条件优化,建立了基于荧光微球和量子点的双信号系统对HE4与CA125联合检测的方法。在此方法中,HE4的检测范围为1-20 ng/m L(40-840 pmol/L),CA125的检测范围为12-200 U/m L,并且成功应用于临床样本的检测。结论:本研究成功制备了5株抗人HE4单克隆抗体,并建立了双抗体夹心ELISA方法;同时建立了一种能并行分析HE4和CA125的联合检测方法,提高了常规ELISA的检测效率。