流感是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病,其传染性强,传播速度快,容易引起在世界范围内的广泛流行,是严重危害人类健康及社会安全的重要传染病之一。流感病毒可分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型,其中甲型流感病毒的抗原性较易发生变异,曾多次引起世界性的流感大流行,导致了大量的人员死亡与巨大的经济损失。目前预防流感的最主要手段就是接种流感疫苗,传统的流感疫苗主要以鸡胚为生产基质,由于生产方法与生产工艺的限制,很难在流感大流行爆发时,短时间内向人群提供足够的疫苗。而在传统的流感疫苗中加入安全有效的佐剂,可以增强抗原的免疫原性,显著降低疫苗的抗原用量,这样,不但可以保证在流感大流行时人群可以及时的接种流感疫苗,还可以降低疫苗的制造成本。在前期研究工作的基础上,本课题主要对纳米乳佐剂及普洱茶提取物作为流感疫苗佐剂的免疫效果及安全性等进行了相关研究,从中得到的一些结果希望能为疫苗佐剂的进一步深入研究和应用提供一些思路与依据。第一部分纳米乳作为H3N2流感病毒灭活疫苗佐剂的相关研究纳米乳是一种由油相、水相、表面活性剂、助表面活性剂按适当的比例混合组成的一种热力学稳定的均相分散体系。由于其对疫苗抗原具有显著的缓释作用,能够诱导高水平抗体的产生,并且能够引起良好的细胞免疫应答,因而将其作为疫苗佐剂的研究展现出了良好的发展前景。本实验首先选择以白油、液体石蜡作为油相,然后通过选取不同的表面活性剂、助表面活性剂与以上两种油相进行组合,将以上三种组分进行混匀,在不断搅拌的条件下通过加水滴定法配制纳米乳,并通过绘制伪三元相图,寻找油相、表面活性剂、助表面活性剂之间的最优比例,从而配制出稳定清透的纳米乳剂。本实验通过筛选,选取了Tween20、Span80、1,2-丙二醇、液体石蜡配方,并按最优比例配制出清透乳剂。之后对其理化性质进行了相关检测。在此之后,将其配制成疫苗免疫小鼠,结果却并不理想,含有纳米乳佐剂的组,小鼠抗体效价均难以起来,甚至达不到无佐剂疫苗组的效果。之后,对此配方中水相的加入量进行了调整,在配制方法上做出了调整,重新进行了动物实验,并设置了低抗原剂量组,结果纳米乳佐剂组产生了良好的免疫佐剂效果,其产生的抗体效价均高于铝佐剂疫苗组,更要远高于无佐剂疫苗组,在较低抗原剂量的情况下,其产生的免疫效果也要远高于无佐剂组。脾淋巴细胞增殖实验显示纳米乳佐剂能够显著提高细胞免疫应答水平。通过对初免后7天内小鼠的体重进行监测,未见乳剂组小鼠体重变化与其他组有显著性差异。纳米乳佐剂急性毒性试验,在最大给药量条件下各组小鼠7天之内全部存活,且未见明显的毒性反应,7天后处死小鼠进行解剖,未见小鼠体内各脏器有明显的病变,因此初步判定此种液体石蜡纳米乳佐剂是一种安全有效的疫苗候选佐剂。第二部分普洱茶提取物作为H3N2流感病毒灭活疫苗佐剂的相关研究普洱茶是原产于我国云南的历史名茶,具有降血脂、降血压、预防心血管疾病等保健功效,特别是其还具有增强机体免疫力的功效。本实验采用普洱茶提取物作为疫苗佐剂,免疫小鼠,测定血凝抑制抗体效价,结果显示,普洱茶提取物佐剂组的抗体效价虽低于氢氧化铝佐剂组的抗体效价,但是要显著高于无佐剂疫苗组的抗体效价,重复验证试验结果证明普洱茶提取物具有明显的佐剂效果。初免后连续7天监测小鼠体重变化,结果未见其体重变化与对照组小鼠有明显差异,初步表明其具有良好的安全性。对实验组小鼠进行体外脾淋巴细胞增殖反应实验,结果显示,普洱茶提取物佐剂组淋巴细胞刺激指数要显著高于无佐剂疫苗组,证明其确能有效刺激小鼠脾淋巴细胞的转化增殖。由以上实验结果可知,普洱茶提取物作为疫苗佐剂具有良好的安全性,且佐剂效果较为明显,但是不难看出,普洱茶提取物是一种复合物,究竟是何种成分起到了免疫增强的作用还有待进一步研究。