不同倍性泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)鳍细胞系的建立及特性分析

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采用组织块培养法启动二倍体、三倍体和四倍体泥鳅鳍组织细胞原代培养,胰蛋白酶消化法传代,目前二倍体、三倍体和四倍体细胞已经分别传至84代、75代和68代。三种细胞均为成纤维细胞样细胞。鳍组织无菌处理方法是:先用质量浓度为10%的碘伏浸泡15min;后用青霉素和链霉素的混合液(500IU/mL青霉素,500μg/mL链霉素)浸泡30min;原代培养和早期传代培养所用的培养基为DMEM/F12,添加体积分数为20%的胎牛血清、10ng/mL人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、20ng/mLI型胰岛素样生长因子(IGF-I)以及10μg/mL硫酸软骨素。30代以后所用培养基为20%FBS-DMEM/F12。细胞培养在25℃、5%CO2培养箱中。对培养的二倍体、三倍体和四倍体细胞进行染色体分析,特征染色体数目分别为50、75和100,同时进行了微卫星实验确定培养的细胞系为二倍体、三倍体和四倍体泥鳅鳍细胞系,分别命名为:DIMF、TRMF和TEMF。在以上培养条件下,二倍体、三倍体和四倍体的倍增时间分别为48.43h、36.01h和41.45h;测定的二倍体、三倍体和四倍体细胞及核的体积比分别为1:1.37:2.37和1:1.53:1.97;细胞经液氮冷冻保存60d后,解冻复苏后测定存活率分别为(80.88±1.38)%,(84.48±1.13)%,(81.57±1.28)%。培养至60代以后的二倍体和三倍体细胞染色体未出现变异,特征染色体数目仍为50和75,而四倍体细胞染色体出现变异,特征染色体数目变为96。不同倍性的泥鳅细胞系的建立丰富了鱼类细胞系的种类,为揭示多倍体鱼类生长、遗传等机制打下基础。
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