论文部分内容阅读
目的蒲公英中的黄酮类物质对自由基清除速度迅速,使酪氨酸酶的活性受到抑制,对防皱、抗菌及护肤的效果显著。蒲公英中的多糖类物质具有广泛的药用价值,对自由基的清除、抑制肿瘤生长及预防感染有良好效果。本课题测定蒲公英活性成分提取工艺,比较研究蒲公英黄酮及多糖对羟自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除能力,另采用牛津杯法测定蒲公英黄酮及多糖的抑菌效果。确定抗氧化和抑菌效果较优的蒲公英活性成分。测定蒲公英黄酮对食道癌(TE-1)细胞的抑制作用,为深入研发利用蒲公英活性成分奠定实验基础。方法采用超声波辅助提取蒲公英黄酮及多糖。以单因素实验为基础选择超声时间、提取温度、液料比、乙醇浓度为自变量,以黄酮及多糖的得率为响应值,运用响应面法考察各提取条件及相互之间的交互作用对黄酮及多糖得率的影响,确定提取蒲公英黄酮及多糖的最佳提取工艺参数。采用紫外分光光度计法测定蒲公英黄酮及多糖对自由基的清除效果并进行比较。采用牛津杯法测定蒲公英黄酮及多糖对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑菌效果并进行比较。采用细胞计数法测定蒲公英黄酮对TE-1细胞生长曲线的影响,采用SRB法测定蒲公英黄酮对TE-1细胞的抑制作用。结果1.超声辅助提取蒲公英黄酮的最佳工艺为:乙醇浓度64%,提取温度45℃,液料比40:1(m L:g),超声时间2.5h,在此条件下蒲公英黄酮得率为13.64 mg/g。2.超声辅助提取蒲公英多糖的最佳工艺为:提取温度69℃,液料比43:1(m L:g),提取时间2h。在此条件下,蒲公英多糖得率为9.85 mg/g。3.蒲公英黄酮及多糖的抗氧化活性:当提取液浓度为2mg/g时,黄酮及多糖抗氧化效果最佳,此时黄酮对羟自由基,DPPH自由基,超氧阴离子自由基的清除率分别为61.96、96.17、86.77%;多糖对羟自由基,DPPH自由基,超氧阴离子自由基的清除率分别为55.92、90.34、80.92%。黄酮对羟自由基,DPPH自由基,超氧阴离子自由基的IC50值分别为1.16、0.54、0.67mg/m L;多糖对羟自由基,DPPH自由基,超氧阴离子自由基的IC50值分别为1.41、0.68、0.74mg/m L。4.蒲公英黄酮及多糖抑菌活性的测定:蒲公英黄酮浓度为2.5mg/m L时,大供试菌种所对应的抑菌圈直径分别为12.2、11.7、11.9mm,相对应的最小抑菌浓度分别为0.25、0.5、0.5mg/m L;蒲公英多糖浓度为2.5mg/m L时,供试菌种的抑菌圈直径分别为11.3、9.7、10.8mm,相对应的最小抑菌浓度分别为0.5、1、1mg/m L。5.蒲公英黄酮对TE-1细胞抑制率的测定:当黄酮储备液浓度为80μg/m L时,对TE-1细胞的抑制作用最强,为54.2%。结论本文选用超声辅助提取的方法从蒲公英中提取黄酮和多糖,对单因素实验和响应面实验进行分析确定了提取黄酮最佳工艺参数为乙醇浓度64%,提取温度45℃,液料比40:1(m L:g),超声时间2.5h,采用此条件所提取的蒲公英黄酮得率为13.64 mg/g;提取多糖最佳工艺参数为提取温度69℃,液料比43:1(m L:g),超声时间2h。采用此条件所提取的蒲公英多糖得率为9.85 mg/g。蒲公英黄酮及多糖对羟自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基均具有较好的清除能力,且黄酮的清除能力优于多糖。一定浓度的蒲公英黄酮及多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均具有抑制效果,抑菌效果随浓度的升高而加强,且黄酮的抑菌效果优于多糖。蒲公英黄酮储备液浓度较低时,对TE-1细胞的抑制效果不明显;随着浓度的升高,抑制率增加,达到60μg/m L后对TE-1细胞的抑制率增长缓慢。当黄酮储备液浓度为80μg/m L时,对TE-1细胞的抑制作用最强,为54.2%。