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自然流产是妇科常见病、多发病，影响妇女的身心健康，其病因复杂，复旦大学妇产科医院根据中医“肾主生殖”的理论，利用补肾益气方治疗因母胎内分泌-免疫网络紊乱所致的流产，具有良好的临床保胎效果，前期临床研究和动物实验研究表明补肾益气方能调控母胎内分泌—免疫网络紊乱，使母胎界面Th1／Th2细胞因子的平衡偏向Th2型，提高母胎免疫耐受，有利于妊娠维持。胎盘作为妊娠期特有的内分泌和免疫器官，在妊娠维持中有重要作用，但补肾益气方如何影响胎盘的内分泌和免疫功能，尤其是如何影响母胎界面Th1／Th2细胞因子平衡值得深入研究。 吲哚胺2，3-二氧化酶(indoleamine 2，3-dioxygenase，IDO)是一种含铁血红素单体蛋白，主要由胎盘滋养细胞和外周血单核／巨噬细胞分泌，通过代谢色氨酸、生成犬尿氨酸而调节免疫功能，一旦胚胎着床并开始与母体血液供应建立连接，胎盘部位的胎儿来源细胞便开始产生IDO。1-甲基色氨酸(1-methyl tryptophan，1-MT)是IDO活性的抑制剂，临床上，1-MT可导致补体活化、炎症及胎儿丢失，这可能与IDO通过降解色氨酸生成犬尿氨酸而抑制T细胞活性有关，IDO在调节孕期母体免疫中可能有重要作用，因此本实验拟研究正常早孕与难免流产绒毛组织和蜕膜组织IDO表达的差异，以探讨IDO与早孕流产的关系，并用血清药理学方法研究补肾益气方调节母胎界面绒毛滋养细胞、蜕膜巨噬细胞IDO的表达与活性对局部Th细胞因子的影响，以进一步探讨补肾益气方保胎的作用机制。 第一部分 人早孕绒毛及滋养细胞吲哚胺2，3-二氧化酶表达与流产的关系 目的：探讨人早孕绒毛组织吲哚胺2，3-二氧化酶(IDO)的表达与流产的关系以及IDO的表达细胞。 方法：用RT-PCR方法检测正常早期妊娠组和早孕难免流产组绒毛组织及JAR细胞株IDOmRNA表达；免疫组化方法分析两组绒毛组织IDO蛋白质表达情况；Western blot方法检测体外培养的人早孕绒毛滋养细胞是否有IDO蛋白质表达；高效液相色谱法检测人早孕绒毛滋养细胞是否存在IDO活性。 结果：难免流产组绒毛组织IDOmRNA及蛋白质表达均低于正常妊娠组；JAR细胞株不表达IDOmRNA；体外培养的人早孕绒毛滋养细胞表达IDO蛋白质；滋养细胞培养上清液中有犬尿氨酸生成，表明有IDO活性。 结论：绒毛组织IDO正常表达是维持妊娠所必需；滋养细胞有IDO表达与活性。 第二部分 补肾益气方调节滋养细胞吲哚胺2，3-二氧化酶表达和活性对母胎界面Th细胞因子的影响 目的：探讨补肾益气方调节离体培养的人早孕绒毛滋养细胞吲哚胺2，3-二氧化酶(IDO)mRNA和蛋白质表达及活性对母胎界面Th细胞因子的影响。 方法：分离人早孕绒毛滋养细胞，分六组分别培养24、48、72小时： 1 组加10％对照血清、不加IDO抑制剂； 2 组加10％对照血清、加抑制剂1-甲基色氨酸(1-MT)500μmol／L； 3 组加10％对照血清、加1-MT1000μmol／L； 4 组加10％中药血清、不加抑制剂； 5 组加10％中药血清、加1-MT500μmol／L； 6 组加10％中药血清、加1-MT1000μmol／L。 用RT-PCR方法检测各组细胞IDOmRNA表达情况，用Western blot方法检测各组细胞IDO蛋白质表达。分别分离人早孕绒毛滋养细胞和蜕膜淋巴细胞后，将两种细胞体外共培养，分组同上，用ELISA方法检测共培养上清液中IL-10、IFN-γ含量，用高效液相色谱法检测细胞培养上清液中色氨酸、犬尿氨酸含量，以二者比值表示IDO活性。 结果：滋养细胞IDOmRNA及蛋白质的表达量与培养时间有关，体外培养72小时内的IDOmRNA及蛋白质表达量随培养时间的延长而增加；1-甲基色氨酸抑制IDO活性，使Th细胞因子平衡偏离Th2型；补肾益气中药血清可提高体外培养的滋养细胞IDOmRNA、蛋白质表达及活性，使Th细胞因子平衡偏向Th2型。 结论：补肾益气方可提高滋养细胞IDOmRNA、蛋白质表达及活性，恢复Th细胞因子平衡，调节母胎免疫。 第三部分 补肾益气方调节蜕膜巨噬细胞吲哚胺2，3-二氧化酶的表达和活性对母胎界面Th细胞因子的影响 目的：研究早孕蜕膜组织IDO表达与流产的关系，并探讨补肾益气方对人早孕蜕膜巨噬细胞IDO表达和活性以及母胎界面Th细胞因子的影响。 方法：RT-PCR方法检测人正常早期妊娠组和早孕难免流产组蜕膜IDOmRNA表达情况；分离人正常早孕蜕膜巨噬细胞，分为六组分别体外培养24、48、72小时： 1 组加10％对照血清、不加IDO抑制剂； 2 组加10％对照血清、加抑制剂1-甲基色氨酸(1-MT)500μmol／L； 3 组加10％对照血清、加1-MT1000μmol／L； 4 组加10％中药血清、不加抑制剂； 5 组加10％中药血清、加1-MT500μmol／L； 6 组加10％中药血清、加1-MT1000μmol／L。 Western blot方法检测各组蜕膜巨噬细胞IDO蛋白质表达情况。分别分离蜕膜巨噬细胞和淋巴细胞后，进行体外共培养，分组同上，ELISA方法检测共培养上清液中IL-10、IFN-γ含量，高效液相色谱法检测细胞培养上清液中色氨酸、犬尿氨酸含量，以二者比值表示IDO活性。 结果：正常妊娠组蜕膜IDOmRNA表达高于难免流产组；IDO抑制剂1-MT使Th细胞因子平衡偏离Th2型；补肾益气中药血清可提高IDO蛋白质表达及活性，恢复Th细胞因子平衡。 结论：蜕膜巨噬细胞IDO正常表达和活性是维持妊娠所必需；补肾益气方可提高IDO活性至正常水平，调节母胎免疫耐受，有利于妊娠维持。