成纤维细胞与肺癌GLC-82细胞相互作用对MMP-1,2,9的影响

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目的研究胚肺成纤维细胞与肺癌细胞在胶原三维立体培养条件下,相互作用对基质金属蛋白酶-1、2、9(MMP-1、2、9)表达的影响。方法采用三维胶原立体培养模型,将肺癌GLC-82细胞、胚肺成纤维细胞(HFL)分别单独培养,及GLC-82细胞和胚肺成纤维细胞按5:1混合培养,48 h后收集上清液。Western blot法检测MMP-1表达水平,明胶酶谱法测定MMP-2、9的表达。结果细胞生长情况观察三维胶原立体培养中,HFL细胞和GLC-82细胞均悬浮生长于胶原中(图1A),细胞在胶原内几乎不分裂,呈单细胞生长。如:HFL细胞在胶原内呈长条状生长,GLC-82细胞呈毛刺样浸润生长。明胶酶普法检测MMP-2、9的表达应用蛋白累积光密度值(integrated optical density,IOD)半定量检测MMP-2、9的表达情况,GLC-82细胞培养组及HFL细胞培养组不表达或表达极少量MMP-9,混合培养组MMP-9表达明显增高:混合培养组proMMP-2表达较GLC-82细胞组(P=0.000<0.05)、HFL细胞组(P=0.001<0.05)表达明显增高,HFL细胞组proMMP-2达较高于GLC-82细胞组(P=0.000<0.05);GLC-82细胞培养组不表达(或少量)MMP-2,但混合培养组MMP-2表达明显高于GLC-82细胞组(P=0.000<0.05)及HFL细胞组(P=0.000<0.05)。Western blot检测MMP-1的表达采用MMP-1蛋白条带的IOD值/对应的β-actin IOD值,半定量比较各组MMP-1的表达。混合培养组MMP-1表达较GLC-82细胞培养组(P=0.000<0.05)及HFL细胞培养组(P=0.000<0.05)表达明显增高;GLC-82细胞组MMP-1表达高于HFL细胞组(P=0.027>0.05)。结论HFL细胞与肺癌GLC-82细胞相互作用能通过上调MMP-1、2、9的表达和活化,促进肺癌侵袭和转移。
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