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天然松质骨来源的脱钙骨基质（demineralized bone matrix,DBM）因具备天然多孔结构、低免疫原性、良好的生物相容性以及可调的力学性能而成为理想的骨修复支架。然而,在DBM制备过程中,支架上的生长因子往往也会被随之除去,降低了DBM的骨修复能力。利用间充质干细胞来源的外泌体（mesenchymal stem cells derived exosomes,MSCs-Exo）与DBM复合能够有效增强支架的促血管生成能力。为进一步提高其骨修复效果,本文拟对MSCs进行遗传修饰,使其过表达促成骨microRNA-764（miR-764）以获得既具有促血管能力又具有促成骨能力的外泌体(ExomiR-764),并复合DBM(ExomiR-764/DBM)以提高支架的促骨修复能力。本文主要研究工作和实验结果如下:（1）过表达miR-764慢病毒载体构建以及miR-764功能鉴定:构建重组质粒pCMV-miR-764,并利用三质粒包装系统生产慢病毒,滴度检测表明滴度值为23.5×108 TU/mL,利用miR-764慢病毒载体转染大鼠骨髓MSCs（rat bone marrow MSCs,rBMSCs）后,细胞中miR-764的相对表达量升高了2.85±0.20倍（p<0.05）。体外诱导分化实验表明过表达miR-764的rBMSCs中碱性磷酸酶（alkaine phosphatase,ALP）活性升高且钙沉积量增加。（2）ExomiR-764/DBM体外功能鉴定:利用超速离心法分离提取MSCs-Exo,并对其形态、大小以及标志蛋白鉴定,结果表明MSCs-Exo为具有双层膜的茶托结构,粒径大小范围为87.87-191.69 nm,且表达分化抗原簇9（cluster of differentiation 9,CD9）和分化抗原簇63（cluster of differentiation 63,CD63）。体外诱导分化实验结果表明ExomiR-764能够增强rBMSCs的ALP活性以及钙沉积能力。对猪股骨松质骨进行脱细胞和脱钙处理以制备直径为5 mm,高度为2 mm的DBM。将DBM与MSCs在4℃孵育8 h以实现复合,MSCs-Exo加载到支架上6 d后的释放量占总量的87.25±0.28%,MSCs-Exo能够从DBM上逐渐释放。将ExomiR-764/DBM与rBMSCs进行体外共培养后,支架中rBMSCs的胞外基质、胶原沉积、骨钙素（osteocalcin,OC）和骨桥蛋白（osteopontin,OPN）的表达量相比于DBM均升高。（3）ExomiR-764/DBM在体内促骨再生效果评价:以DBM为对照组,将ExomiR-764/DBM植入大鼠颅骨缺损部位4周后,骨缺损部位的细胞浸润、胶原沉积和内源性OC和OPN表达量增加,且有CD34阳性细胞聚集。综上所述,本文证实了ExomiR-764/DBM在体外可促进rBMSCs的成骨分化,且能促进大鼠颅骨缺损部位的骨再生。