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骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是一类多能性成体干细胞,在具有极强的更新增殖能力及跨胚层诱导分化能力的同时还具有独特的免疫调控能力,在炎症环境下可定向迁移到炎症损伤部位并发挥作用;干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)是一种重要的促炎性因子,相关研究显示IFN-γ可增强/活化BMSCs的免疫抑制潜能。目前,关于IFN-γ对犬BMSCs免疫调控的作用及其作用机制尚未得到证实。因此,本文旨在探讨IFN-γ是否能激活犬BMSCs的免疫抑制潜能,使其发挥免疫调控作用,并且初步探索其发挥作用的主要方式和机制。试验一IFN-γ对犬BMSCs增殖能力和免疫相关因子分泌能力的影响。试验选用不同浓度IFN-γ与犬BMSC作用72h后,采用CCK-8法检测其增殖情况,RT-qPCR检测免疫相关基因的表达,ELISA检测分泌免疫抑制因子的能力。结果如下:IFN-γ能有效促进BMSCs增殖,有一定的剂量依赖性;使BMSCs显著上调TLR3、IDO1mRNA的表达(p<0.05),下调COX-2 mRNA的表达,而TLR4、IDO2 mRNA的表达无显著性变化(p>0.05);使可溶性免疫活性因子IL-10、HGF、犬尿氨酸的分泌显著增加,而PGE2和TGF-β的分泌降低(p<0.05)。试验二IFN-γ刺激条件下犬BMSCs及其上清液对淋巴细胞的增殖及免疫功能的影响。试验选用50ng/ml的IFN-γ预刺激犬BMSCs 72h后收集细胞和上清液进行试验分组,其中对照组(SPL)为淋巴细胞单独培养组,试验组为6个,包括细胞共培养组(2个):未预刺激的BMSCs组(BMSCs-nor组)、IFN-γ刺激后的BMSCs组(BMSCs-IFN组)按1:10与用5μg/ml conA活化的淋巴细胞共同培养;培养上清液组(4个):20%未预刺激上清液培养组(SI-nor组)、40%未预刺激上清液培养组(SII-nor组)、20%刺激上清液培养组(SI-IFN)、40%刺激上清液培养组(SII-IFN)与RMPI-1640混合培养用5μg/ml conA活化的淋巴细胞。采用CCK-8法检测淋巴细胞的增殖情况,流式细胞术法检测淋巴细胞CD3~+CD4~+CD8~+分型情况,RT-PCR检测Th1/Th2亚群细胞因子及促炎因子基因的表达情况。试验结果如下:犬BMSCs可以通过细胞直接接触或使用上清液间接培养的方式发挥免疫调控作用,包括抑制淋巴细胞增殖,降低CD4~+、CD8~+含量及其比值,诱导淋巴细胞向Th2亚群分化和抑制炎症因子TNF-α、IL-8 mRNA的表达。细胞直接接触的方式对BMSCs降低CD4~+、CD8~+含量及其比值的作用更显著,IFN-γ的刺激对BMSCs抑制淋巴细胞增殖、诱导向Th2亚群分化、抑制炎症因子TNF-αmRNA的表达作用更显著。结论:(1)本试验证明IFN-γ促进犬BMSCs增殖,激活TLR3、IDO-1 mRNA的表达,促进免疫活性因子的分泌,增强BMSCs对小鼠脾淋巴细胞的免疫调节作用,主要通过抑制淋巴细胞增殖,影响淋巴细胞向Th2亚群分化及抑制促炎因子TNF-αmRNA的表达。(2)犬BMSCs对淋巴细胞的免疫调控作用可以通过细胞直接接触和使用上清液间接培养的方式发挥,细胞直接接触的方式对抑制淋巴细胞增殖及降低CD4~+CD8~+含量及其比值的作用更为显著。