阿维拉霉素属于寡糖类抗生素,能维持动物肠道菌群平衡和抑制病菌,尤其对革兰氏阳性菌有明显抑制作用,常作为新型消化促进剂和代谢调节剂添加于饲料中用于防病和促生长。由于抗生素的滥用和误用使得耐药细菌（ARB）和耐药基因（ARGs）快速出现,从而降低了抗生素对人和动物病原体的治疗潜力,同时残留在动物体内的抗生素会通过食物链进入人体,严重危害人体健康。因此欧盟在2006年完成了禁止最后四种抗菌促生长剂（莫能菌素,盐霉素,阿维拉霉素和黄霉素）使用的立法。2010年韩国农林渔业食品部（MIFAFF）发布通报,禁用包括阿维拉霉素在内的八种抗生素。2019年中国发布《食品中兽药最大残留限量》,明确规定了阿维拉霉素代谢物在动物体内各靶组织中的残留限量标准。而在动物体内残留超过限量标准的抗生素,往往是因为滥用、不遵守用药规范等导致过量添加。目前,尚未有报道建立适用于基层的阿维拉霉素快检技术。为规范和引导养殖户合理使用阿维拉霉素,便于检测机构快速初筛,保护畜禽产品的进出口贸易市场,保障食品质量安全,因此需要建立一种检测阿维拉霉素的快速、便捷、灵敏准确的技术。胶体金免疫层析技术是以胶体金颗粒作为示踪标志物应用于抗原抗体检测的一种免疫学分析技术,具有易操作、检测快速、结果可视化等优点,适用于现场检测和大规模筛查。而建立胶体金免疫检测技术的关键在于获得高特异性的抗体,它是利用体外培养的杂交瘤细胞通过腹水诱生法来获得。由于体外培养体系中血清成分存在的缺点与风险,因此需要对杂交瘤细胞的体外培养条件进行优化。本文以本实验室构建的抗阿维拉霉素杂交瘤细胞2GC8（保藏编号:CGMCC NO.17485）为研究对象,优化体外培养条件,并通过腹水诱生获得单抗用于建立胶体金免疫层析技术,实现对阿维拉霉素的快速检测。主要包括以下内容:（1）杂交瘤细胞体外培养条件的优化以细胞生长情况和抗体分泌情况为考察指标,确定DMEM/F12为基础培养基。考察不同血清浓度对细胞的影响,对细胞进行减血清驯化并使其适应7.5%血清浓度。通过单因素实验初步确定细胞培养基中6种营养因子的添加浓度,在此基础上依次应用Plackett-Burman设计、最陡爬坡实验和Box-Behnken设计等3种实验设计方法,得到添加因子及浓度为:胰岛素8.197μg/m L、转铁蛋白7.522μg/m L、乙醇胺4.232μg/m L,最终获得一种优化的低血清培养基组成,并对其进行模型验证和摇瓶放大。结果表明验证优化的培养基对细胞生长和抗体分泌效果较好。（2）胶体金免疫层析技术的建立利用杂交瘤细胞通过小鼠体内腹水诱生获得含目标单抗的腹水,经过辛酸-硫酸铵法和亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE鉴定其纯度较高。以40nm胶体金颗粒标记纯化后单抗,优化标记条件得到最佳抗体添加浓度为9μg/m L,最佳标记p H为7.5,并以此条件制备金标抗体。优化T线和C线的划膜浓度组合,构建胶体金免疫层析试纸条并对其进行性能评价。通过灵敏度实验得到试纸条检测限为2μg/m L。利用阿维拉霉素的结构类似物及衍生物测试证实试纸条特异性良好。对多组试纸条进行测试验证重复性较好。说明成功建立了检测阿维拉霉素的胶体金免疫层析技术。