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背景和目的:异常脂质介导的肝内炎症-免疫调节紊乱相关的低度系统性炎性信号途径活化在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生发展中占有重要地位。作为肝内代谢-免疫-炎症活化过程中的关键细胞,Kupffer细胞的活化在NAFLD中发挥重要作用。Kupffer细胞是定居肝脏的巨噬细胞,巨噬细胞是体内重要的炎症-免疫细胞,具有高度的可塑性和异质性,可针对不同的微环境刺激信号作出应答分化成具有不同功能的表型细胞即极化。过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)和核因子-κB(NF-κB)信号通路在调控机体能量代谢和炎症免疫反应中具有重要地位并参与巨噬细胞的极化。本研究拟通过动物模型和细胞学实验探讨高脂饮食诱导的NAFLD和不同种类脂肪酸对Kupffer细胞M1-M2极化的影响及核受体PPAR-γ和NF-κB信号通路在脂质诱导的巨噬细胞极化中的作用,通过调控核受体PPAR-γ的表达探讨其对脂质诱导的巨噬细胞极化转变的作用和机制,并观察体内PPAR-γ激动剂对高脂饮食诱导的Kupffer细胞极化和肝脏脂肪变性的影响。方法:高脂饮食喂饲建立小鼠NAFLD模型,肝组织HE染色观察肝脏脂肪变性,免疫组织化学观察Kupffer细胞数量、分布和极化表型;胶原酶原位灌注分离Kupffer细胞,体外建立不同种类脂肪酸[饱和脂肪酸(SFAs)和多不饱和脂肪酸(PUFAs)]环境下Kupffer细胞/巨噬细胞培养体系,或采用PPAR-γ激动剂和拮抗剂分别建立PPAR-γ高表达和低表达的巨噬细胞模型并以不同种类脂肪酸干预,Real-time PCR检测M1/M2极化基因的表达,ELISA检测炎性因子的分泌水平,Western Blot检测NF-κB信号通路和PPAR-γ等蛋白的表达,免疫共沉淀检测巨噬细胞核内PPAR-γ和NF-κBp65蛋白相互作用;给予NAFLD模型小鼠PPAR-γ激动剂罗格列酮2-4周灌胃治疗,观察Kupffer细胞极化和肝脏脂肪变性改变情况。结果:(1)Kupffer细胞数量、分布和极化表型的动态变化与高脂饮食诱导的肝脏脂肪变性程度及肝内炎症反应密切相关,其中,长期(16周)高脂饮食引起Kupffer细胞数量明显增加且集中围绕肝内脂肪空泡分布,表现M1型为主的极化,伴有炎性因子分泌增加。(2)饱和脂肪酸-棕榈酸(PA)诱导Kupffer细胞/巨噬细胞M1型为主的M1/M2混合型极化并促进炎性因子的分泌,同时显著上调巨噬细胞NF-κB信号通路的蛋白磷酸化活化和PPAR-γ蛋白表达,而多不饱和脂肪酸-二十二碳六烯酸(DHA)则主要诱导Kupffer细胞/巨噬细胞M2型极化,对巨噬细胞NF-κB信号通路无影响但明显增加PPAR-γ蛋白表达。(3)PPAR-γ激动剂可使饱和脂肪酸PA诱导的巨噬细胞发生M1向M2的极化转换,并且巩固多不饱和脂肪酸DHA诱导的M2型极化,相反,PPAR-γ拮抗剂则降低各种脂质诱导的巨噬细胞的M2型极化,增强饱和脂肪酸PA诱导的M1型极化;同时PPAR-γ激动剂抑制脂质干预的巨噬细胞NF-κB信号通路并增强PPAR-γ和NF-κBp65蛋白相互作用,而PPAR-γ拮抗剂则具有相反作用。(4)PPAR-γ激动剂罗格列酮治疗抑制高脂饮食诱导的Kupffer细胞M1型极化并减轻肝脏脂肪变性和肝内炎症反应。结论:(1)Kupffer细胞数量、分布和极化表型的动态变化与高脂饮食诱导的肝脏脂肪变性程度及肝内炎症反应密切相关。(2)不同种类脂肪酸对Kupffer细胞/巨噬细胞M1-M2极化产生不同影响,饱和脂肪酸诱导的巨噬细胞M1型极化与NF-κB信号通路的活化密切相关,而PPAR-γ在不同脂质介导的巨噬细胞M2型活化中发挥重要作用。(3)上调PPAR-γ的表达使脂质诱导的巨噬细胞极化发生M2型偏倚,可能与PPAR-γ表达上调加强了其与NF-κBp65之间的相互作用从而使得NF-κB信号通路活性降低有关,下调巨噬细胞PPAR-γ的表达则具有相反效应。(4)体内PPAR-γ激动剂的应用抑制高脂饮食诱导的Kupffer细胞M1型极化并缓解肝脏脂肪变性。