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肝纤维化（hepatic fibrosis，HF）是多种慢性致病因素作用于肝脏引起细胞外基质（extracellular matrix，ECM）过量沉积的创伤愈合过程。肝星状细胞（hepatic stellates cell，HSC）的活化在肝纤维化发展过程中起着至关重要的作用，激活的HSC是产生ECM的主要来源细胞。TGF-β1被认为是主要的致HSC活化的细胞因子。近年来研究显示microRNA (miRNA)广泛参与调节细胞增殖、分化、凋亡等一系列重要生物学进程。miR-146a是第一个被发现与免疫功能相关的miRNA，miR-146a是否参与调控TGF-β1诱导的HSC的活化目前还未见文献报道。本研究观察miR-146a在HSC活化过程中和肝纤维化形成过程中的表达变化，并深入探讨其对HSC活化增殖的影响及其作用的分子机制，以揭示干预HSC活化的新的作用靶点。实验采用CCl4皮下注射建立大鼠肝纤维化模型，正常组10只、CCl4处理组15只。自处理之日开始，除正常组，其他各组雄性大鼠皮下注射50%CCl4植物油溶液(1ml/kg)每周2次，共12周；正常组给予同样剂量花生油皮下注射。12周末，取肝组织进行病理组织学和Masson胶原染色检测，并检测α-SMA在大鼠肝组织中的表达变化。通过一步法实时定量PCR检测不同浓度TGF-β1刺激的HSC和CCl4诱导的肝纤维化组织中miR-146a的表达。通过脂质体LipofectamineTM2000转染miR-146a mimics（模拟物）到大鼠肝星状细胞株HSC-T6内以观察对TGF-β1诱导的HSC-T6增殖的影响，荧光倒置显微镜观察细胞的转染效率。体外培养的HSC，转染60nM miR-146a mimics进入细胞，6h后用TGF-β110ng/ml刺激细胞24h或48h后，利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法，细胞周期分析方法以及流式细胞术技术观察miR-146a对TGF-β1诱导的HSC的增殖的影响。应用生物信息方法发现Smad4是miR-146a的潜在靶点。利用RT-PCR，real-time qPCR和western blots，分别检测TGF-β1诱导的HSC中活化的标志物α-SMA和Smad4mRNA及蛋白水平的表达。结果发现用不同浓度(0,5,10,15ng/ml) TGF-β1刺激HSC，miR-146a的表达呈剂量依赖性的下调。miR-146a在CCl4诱导的肝纤维化组织中表达也是下调的。与阴性对照组相比，转染60nM的miR-146a模拟物进入HSC可以明显减少TGF-β1诱导的α-SMA的表达。过表达miR-146a可以显著抑制TGF-β1诱导的HSC的增殖，增加细胞凋亡。生物信息技术显示Smad4是miR-146a的潜在靶点。在TGF-β1刺激的HSC中，miR-146a可以显著降低Smad4蛋白水平的表达，而不能降低其mRNA水平的表达，提示miR-146a是在转录后水平调节Smad4的表达。以上研究表明，miR-146a通过转录后抑制Smad4的表达参与调控TGF-β1诱导的HSC的增殖，这可能成为肝纤维化防治的潜在作用靶点。