【摘 要】
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探究雌配子体发育的基因调控表达机制对于揭示植物发育分子机制有重要意义。油松28号不育系是因雌配子体发育停滞所致。拟从分子生物学角度探索其败育原因,为确定差异表达蛋
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探究雌配子体发育的基因调控表达机制对于揭示植物发育分子机制有重要意义。油松28号不育系是因雌配子体发育停滞所致。拟从分子生物学角度探索其败育原因,为确定差异表达蛋白质的功能,需要筛选出发育相关的差异表达mRNA。本文通过多种RNA提取方法的比较,采用Plant RNA assistant kit试剂盒获得了高质量油松胚珠总RNA,并利用Super SMART cDNA合成技术高效合成cDNA第1链优化扩增第2链,最终利用抑制性消减杂交法构建了不育系胚珠和可育系胚珠正向和反向cDNA消减文库。正向库中随机挑选100个阳性克隆,反向库中随机挑选75个阳性克隆,检测后,得到正向86个有效克隆和反向71个有效克隆进行测序,又得到正向文库72个反向文库55个有效序列。对这些序列,通过BLASTx对这些序列进行同源性分析,筛选出纤维素合成酶,谷胱甘肽过氧化物酶,水孔蛋白,锌指蛋白,过氧化氢酶,胚胎发育晚期丰富蛋白等可能与发育相关的蛋白等可能与发育相关的蛋白。
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