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本文在建立了豆梨低玻璃化高效快繁技术的基础上,针对引起试管苗玻璃化的影响因素进行比较研究,从生理生化和分子角度分析豆梨试管苗玻璃化的形成机制,并对玻璃化苗恢复技术进行了研究。主要研究结果如下：1.建立豆梨低玻璃化高效快繁技术。以豆梨的茎段为外植体,研究6-BA、NAA、蔗糖、琼脂、活性炭等因素对豆梨试管苗的影响,分析了4种基本培养基(MS、AS、NN69、WPM),6-BA和NAA的不同浓度配比以及2种不同培养方式对豆梨增殖效果的影响,还比较了NAA和IBA这2种激素对豆梨生根的影响。结果表明：在豆梨组织培养过程中,高浓度6-BA对豆梨增殖系数和玻璃化现象均有明显的促进作用,活性炭对增殖系数、玻璃化率及苗高起到抑制作用,高浓度NAA直接促进茎的生长,以MS作为基本培养基,适宜增殖培养基为MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.2mg/L,适宜培养方式为增殖培养基与MS空白培养基上隔代交替培养,适宜生根培养基为1/2 MS +1.5mg/LIBA.2.研究了玻璃化试管苗的恢复技术。以正常增殖状态下产生的玻璃化苗(轻度和重度)为材料,采取不同措施对玻璃化苗进行恢复,并对玻璃化苗(轻度和重度)、恢复苗和正常苗在形态解剖学、生理生化、叶绿素荧光等方面进行比较研究。结果表明：对玻璃化苗(轻度和重度)进行适当的水分控制和紫外线照射均能使两种玻璃化苗有不同程度的恢复,其中将材料在无菌空三角瓶中封口放3天,使其适当失水后,再将材料转接到MS空白培养基中培养30天,最高恢复率可达100%。3.比较豆梨不同程度玻璃化苗和正常苗叶片超微结构、叶绿素荧光和抗氧化酶活性差异。结果表明：(1)豆梨玻璃化苗叶片气孔呈关闭状态,细胞器受到损伤,叶绿体数量减少,类囊体膜排列紊乱。(2)玻璃化叶片比正常叶片有较低的Fv/Fm, Fv/Fo, qP和PhiPS2,过剩的能量将在PSⅡ反应中心积累,产生大量ROS。(3)正常苗的SOD、CAT酶活性均高于玻璃化苗,并且玻璃化程度越重,活性越低；POD酶活性则呈相反趋势,表现为正常苗低于玻璃化苗。4.利用甲基化敏感扩增多态性(Methylation-ensitive amplification poly-morphism, MSAP)技术分析豆梨正常苗和玻璃化苗CCGG位点胞嘧啶甲基化模式和水平的差异。结果表明：玻璃化苗总基因组DNA甲基化比率为83.3%,低于正常苗(87.6%)。此外,玻璃化苗去甲基化位点与叶片等组织衰亡有关,在DNA水平上,可能是叶片等组织衰老发育相关区域甲基化状态的改变直接影响植株的发育。