DNA疫苗与传统疫苗相比,具有明显的优势。但由于DNA为生物大分子,难以被细胞直接摄入,而且核酸容易降解。因此“裸”DNA疫苗难以被抗原提呈细胞摄入、表达及抗原递呈,导致免疫应答水平较低,其推广使用受到限制。细菌菌影(bacterial ghosts,BGs)是裂解细菌细胞壁、去除细胞质内容物之后形成的细菌空壳。它具有完整的天然表面抗原,不仅能直接作为疫苗使用,还可以作为一种良好的载体。本研究利用干酪乳杆菌菌影作为包装载体,分析其对DNA免疫效果的影响。首先,将质粒pCI-EGFP和菌影装载的pCI-EGFP分别与RAW264.7细胞和原代巨噬细胞混匀,未处理的巨噬细胞作为对照,通过荧光显微镜观察。结果显示:质粒转染RAW264.7细胞和原代巨噬细胞后,只观察到微弱的荧光,而菌影装载质粒转染RAW264.7细胞和原代巨噬细胞后,可观察到大量绿色荧光,表明EGFP在转染细胞中获得了有效表达。同时,通过流式细胞仪检测转染效率,结果显示:质粒转染RAW264.7细胞和原代巨噬细胞后,阳性细胞率分别为1.4%和1.8%,而菌影装载质粒转染RAW264.7细胞和原代巨噬细胞后,阳性细胞率分别为7.2%和57.6%。转染效率明显提高,进一步验证了荧光显微镜的观察结果,表明干酪乳杆菌菌影可有效促进巨噬细胞对DNA的转染。通过荧光定量PCR检测巨噬细胞中IL-1β、IL-10、TNF-α、iNOS细胞因子和Toll受体基因mRNA的变化,结果显示:干酪乳杆菌菌影包装DNA刺激巨噬细胞后,IL-1β、IL-10、TNF-α、iNOS、TLR2和TLR9 mRNA含量增加,TLR4 mRNA含量降低。说明菌影包装DNA转染巨噬细胞后,可显著调节相关免疫分子基因表达。分别用pCI-PRV-VP6质粒和菌影装载pCI-PRV-VP6质粒刺激骨髓来源的树突细胞,未处理的树突细胞作为对照,通过流式细胞仪检测树突细胞表面成熟标志分子MHC-Ⅱ、CD80和CD86的数量变化。结果显示:经干酪乳杆菌菌影刺激后,树突细胞成熟标志分子含量均增加,表明干酪乳杆菌菌影能够刺激树突细胞成熟。通过荧光定量PCR检测不同处理的树突细胞中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ基因mRNA含量变化。结果显示:干酪乳杆菌菌影包装DNA刺激树突细胞后,以上基因mRNA含量均显著增加。说明菌影包装DNA刺激树突细胞后,可显著上调相关基因表达。混合淋巴细胞反应结果显示:当树突细胞与T细胞混合比例为1:1和1:10时,菌影包装DNA刺激后的树突细胞能够有效刺激T细胞增殖,表明菌影可促进树突细胞的成熟和活化。最后,分别用pCI-PoRV-VP6和干酪乳杆菌菌影包装的pCI-PoRV-VP6经口服、肌肉和腹腔免疫小鼠,检测菌影包装DNA后对免疫效果的影响,间接ELISA方法检测血清中特异性IgG水平。结果显示:经口服、肌肉和腹腔不同途径免疫后,菌影包装DNA组的血清IgG含量显著高于DNA免疫组,表明菌影包装DNA免疫后可有效提高体液免疫效果。应用MTT法检测淋巴细胞增殖指数,结果显示:经口服和腹腔免疫后,菌影包装DNA组的脾细胞增殖指数显著高于DNA免疫组。经肌肉免疫后,菌影包装DNA组和DNA免疫组的脾细胞增殖指数差异不显著。通过流式细胞仪检测CD4~+/CD8~+T细胞比例,结果显示:通过口服和腹腔免疫后,菌影包装DNA组与DNA免疫组相比,CD4~+T细胞比例均显著增加,表明菌影包装DNA免疫后,显著提高了细胞免疫水平。应用ELISA方法检测IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ细胞因子,结果显示:菌影包装DNA组的血清细胞因子含量显著高于DNA免疫组,表明菌影包装DNA免疫后,增加细胞因子的分泌。综上,将干酪乳杆菌菌影包装DNA后,能够提高DNA在巨噬细胞中的转染效率,并促进树突细胞成熟和活化,进一步调节免疫相关因子基因的表达,从而有效提高体液免疫和细胞免疫应答水平,为研制新型、安全、有效的DNA递送载体,提供了一个新的技术平台,也为其他蛋白质或药物以干酪乳杆菌菌影作为递送载体的研究提供了参考。