糖代谢基因在肺腺癌组织中的表达及沙参麦冬汤干预的实验研究

来源 :湖北中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ahhfwwzy
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目的探讨糖代谢基因GLUT1、HK2和LDHAmRNA在肺腺癌组织及对应的癌旁组织中表达的差异及与临床病理特征的相关性。在此基础上,探讨沙参麦冬汤含药血清对人肺腺癌A549和SPCA1细胞的抗癌作用及对人肺腺癌细胞糖代谢的影响,并探索其机制。为临床应用沙参麦冬汤治疗肺腺癌提供科学依据。
  方法1、选取手术切除的新鲜肺腺癌组织病例标本,每例分别取癌组织和对应的癌旁组织各一份,分为癌组织组和癌旁组织组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测癌组织和对应的癌旁组织中葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、己糖激酶2(HK2)和乳酸脱氢酶A(LDHA)mRNA的表达。并分析其与肺腺癌患者临床病理特征的相关性。
  2、利用GEPIA数据库对肺腺癌患者GLUT1、HK2、LDHA三个基因的表达进行生存分析。评估GLUT1、HK2和LDHA对肺腺癌患者预后的影响。
  3、制备无菌的沙参麦冬汤含药血清,利用CellCountingKit-8(CCK-8)法测定沙参麦冬汤含药血清对人肺腺癌A549和SPCA1细胞增殖的影响。AnnexinV-FITC流式双染法检测沙参麦冬汤含药血清对人肺腺癌A549和SPCA1细胞凋亡的影响。
  4、通过体外培养人肺腺癌A549和SPCA1细胞,用沙参麦冬汤含药血清干预48h后,利用RT-qPCR和Westernblot法检测沙参麦冬汤含药血清对GLUT1、HK2、LDHA、HIF-1α基因的表达量及蛋白水平的影响。
  5、利用细胞划痕实验及Transwell侵袭实验评估沙参麦冬汤含药血清对人肺腺癌A549和SPCA1细胞迁移和侵袭的影响。
  6、利用葡萄糖检测试剂盒和乳酸检测试剂盒,检测沙参麦冬汤含药血清对人肺腺癌细胞葡萄糖消耗及乳酸生成的影响。
  结果1、36例肺腺癌组织中GLUT1的阳性表达率为86.11%(31/36),在对应的癌旁组织中,阳性表达率为27.78%(10/36),两者比较差异有统计学意义(x2=24.982,P=0.000),且36例肺腺癌组织标本中GLUT1mRNA的表达量明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01)。
  2、36例肺腺癌组织中HK2的阳性表达率为75.00%(27/36),在对应的癌旁组织中,阳性表达率为44.44%(16/36),两者比较差异有统计学意义(x2=6.986,p=0.005)。36例肺腺癌组织标本中HK2mRNA的表达量明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01)。
  3、36例肺腺癌组织中LDHA的阳性表达率为80.56%(29/36),在对应的癌旁组织中,阳性表达率为33.33%(12/36),两者比较差异有统计学意义(x2=14.762,p=0.000)。36例肺腺癌组织标本中LDHAmRNA的表达量明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01)。
  4、GLUT1、HK2、LDHA在不同性别、年龄、有无淋巴结转移、不同分期的肺腺癌组织中的表达差别均无统计学意义(P>0.05)。
  5、利用GEPIA数据库对其收录的478名肺腺癌患者进行生存分析。结果显示,GLUT1、HK2、LDHA高表达的患者比低表达的患者预后更差,差异有统计学意义(p<0.05)。
  6、CCK-8法和AnnexinV-FITC流式双染法检测沙参麦冬汤含药血清对人肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响,结果发现,沙参麦冬汤含药血清可以抑制人肺腺癌A549、SPCA1细胞的增殖,促进其凋亡。
  7、RT-qPCR和Westernblot结果显示,沙参麦冬汤含药血清可以下调GLUT1、HK2、LDHAmRNA的水平及蛋白的表达量。进一步研究发现,沙参麦冬汤还可以下调缺氧诱导因子HIF-1α的表达,表明沙参麦冬汤可能是通过调控HIF-1α信号通路来影响肺腺癌糖代谢进程,发挥其抗肿瘤的作用。
  8、细胞划痕实验及Transwell侵袭实验结果显示,沙参麦冬汤含药血清能明显抑制人肺腺癌A549、SPCA1细胞的迁移和侵袭,与空白组及对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。
  9、乳酸及葡萄糖检测结果显示,与空白组及对照组相比,沙参麦冬汤组能抑制人肺腺癌细胞葡萄糖消耗及乳酸生成,差异有统计学意义(P<0.05)。
  结论1、GLUT1、HK2、LDHA在肺腺癌组织中的表达高于相对应的癌旁组织。但与肺腺癌患者性别、年龄、是否有淋巴结转移、肿瘤分期等均无关。2、GLUT1、HK2、LDHA可能参与了肺腺癌的发生及进展,且高表达的GLUT1、HK2、LDHA与患者更差的预后有关。3.沙参麦冬汤有较好的抑制肺腺癌的作用,其抑制肺腺癌的机制可能与调控肿瘤细胞糖代谢有关。
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