联合应用共刺激分子B7.1和4-1BB的抗白血病作用研究

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目的:1.构建包含hB7.1cDNA的重组真核表达载体pDisplay-hB7.1.2.使hB7.1在NB4和HL60上高效表达(NB4-hB7.1,HL60-hB7.1).3.分析单用或联合hB7.1基因修饰AML细胞和抗h4-1BBmAb的抗肿瘤免疫效应.方法:1.应用PCR方法扩增hB7.1基因片断,与表达载体pDisplay同时经ApaI/SalI双酶切、纯化、连接后,构建重组真核表达载体.2.应用脂质体转染技术以hB7.1cDNA转染NB4和HL60细胞.3.应用MTT比色法、免疫荧光法及FACS等分析hB7.1基因修饰AML细胞和抗h4-1BBmAb的抗肿瘤作用(促进T细胞增殖、细胞因子分泌和增强细胞杀伤活性).结果:1.成功构建了含hB7.1基因的重组真核表达载体pDisplay-hB7.1.2.实现了hB7.1在NB4和HL60上的高效表达,获得NB4-hB7.1和HL60-hB7.1.3.4-1BB在静止T细胞上无表达而在经PHA活化的T细胞上逐渐表达,至第7天为高峰(表达率56.4%);且抗h4-1BBmAb可增强PHA刺激增殖能力约2倍.4.联合hB7.1基因修饰AML细胞和抗h4-1BBmAb的抗肿瘤作用较单用其一提高3-5倍.结论:1.应用脂质体技术可使质粒载体介导的hB7.1基因在NB4和HL60细胞上高效表达.2.首次证实联合应用hB7.1基因修饰AML细胞和抗h4-1BBmAb的共刺激活性和抗肿瘤作用较单用其一显著为佳.3.该实验为人AML免疫治疗提供了新策略.
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