β-榄香烯对人肺腺癌裸鼠移植瘤放疗增敏作用的实验研究

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我国是肺癌高发区,肺癌对人们的生命健康带来严重的威胁。目前肺癌的治疗尤以手术为主,结合放疗、化疗、免疫及靶向治疗为辅的综合治疗原则。由于人们的体检意识有待提高,且肺癌早期不具有典型的临床症状,故而大部分患者就诊时已处于中晚期,目前放疗为中晚期肺癌的重要治疗手段之一。在不导致肿瘤临近正常组织放射性损伤的前提下,很难达到肿瘤自由基辐射剂量,因此,在较低放射剂量下的较高治疗效果,将对癌症患者治疗有益。榄香烯是我国从中药温莪术中自主提取的萜烯类化合物,β-榄香烯是榄香烯的主要抗肿瘤活性成分,因其有广谱、低毒、高效等特点,目前已广泛应用于临床上多种恶性肿瘤的治疗。近年来对于β-榄香烯作为增敏剂对放疗的增敏作用是基础医学和临床医学研究的热点,对其增敏机制的研究集中体现在抑制肿瘤血管形成、促使肿瘤细胞G-M期阻滞、诱导肿瘤细胞凋亡及影响肿瘤细胞中DNA双链损伤修复等方面。尽管如此,β-榄香烯放疗增敏机制的研究仍然较为局限。经查阅国内外文献,β-榄香烯是否通过抑制缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其下游葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)通道的表达来发挥放疗增敏作用,尚未见报道,值得研究。为了探讨β-榄香烯对人肺腺癌裸鼠移植瘤放疗的增敏作用及其机制是否与HIF-1α和GLUT-1的表达相关。本研究通过建立人肺腺癌A549细胞株裸鼠移植瘤模型,待移植瘤体积达到75mm3大小时,予以随机分为生理盐水组(对照组)、β-榄香烯组(榄香烯组)、β-榄香烯+放疗组(联合组),生理盐水+放疗组(放疗组),动态监测各移植瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,各组观察16天,次日处死裸鼠,完整剖取瘤体,获得各组移植瘤倍增时间,计算增敏系数(EF),将各组肿瘤组织分别进行苏木素伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色观察人肺腺癌A549细胞株移植瘤的形态学特点及采用第二代聚合酶二步法(PV法)做HIF-1α及GLUT-1免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测HIF-1α及GLUT-1 m RNA表达水平、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HIF-1α及GLUT-1蛋白表达水平。结果显示,与对照组、榄香烯组、放疗组相比,联合组有较为明显的抑瘤作用。Real-Time PCR显示对照组、榄香烯组、放疗组、联合组HIF-1αm RNA和GLUT-1 m RNA表达分别为1.15±0.16及1.08±0.18、0.58±0.04及0.64±0.09、0.54±0.12及0.58±0.10、0.22±0.01及0.20±0.07。Western blot法检测结果显示HIF-1α和GLUT-1蛋白表达在对照组分别为1.04±0.04和1.18±0.05,在榄香烯组分别为0.83±0.04和0.85±0.05,在放疗组分别为0.77±0.02和0.79±0.05,在联合组分别为0.50±0.04和0.51±0.06,与对照组比较,榄香烯组、放疗组、联合组移植瘤HIF-1α、GLUT-1 m RNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01),榄香烯组与放疗组之间HIF-1α、GLUT-1 m RNA及其蛋白表达水平无明显差异,无统计学意义(P>0.05),而与榄香烯组、放疗组比较,联合组HIF-1α、GLUT-1 m RNA及其蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。HIF-1α、GLUT-1免疫组化的表达情况:在联合组的平均光密度(AOD)分别为(1.23±0.41)×10-2、(0.80±0.27)×10-2明显低于对照组(3.42±0.22)×10-2、(2.49±0.41)×10-2以及榄香烯组(2.02±0.18)×10-2、(1.91±0.13)×10-2和放疗组(1.86±0.13)×10-2、(1.60±0.08)×10-2,差异具有统计学意义(均P<0.05)。依据Pearson分析结果,HIF-1α与GLUT-1表达呈正相关(p<0.01,r>0.8)。研究结果表明,β-榄香烯对A549细胞异种移植肿瘤具有放射增敏作用。放射增敏的分子作用机制可能与HIF-1α及其下游GLUT-1表达的下调有关,HIF-1α和GLUT-1的表达呈正相关,这可能成为非小细胞肺癌(NSCLC)的临床治疗的新靶点。
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