【摘 要】
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牛呼吸道病毒病主要致病因子为牛疱疹病毒1型（Bovine Herpes Virus 1,BHV-1）、牛呼吸道合胞体病毒（Bovine Respiratory Syncytial Virus,BRSV）、牛副流感病毒3型（Bovine Parainfluenza Virus Type 3,BPIV-3）和牛病毒性腹泻病毒（Bovine Viral Diarrhea Virus,BVDV）。根据BH
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牛呼吸道病毒病主要致病因子为牛疱疹病毒1型（Bovine Herpes Virus 1,BHV-1）、牛呼吸道合胞体病毒（Bovine Respiratory Syncytial Virus,BRSV）、牛副流感病毒3型（Bovine Parainfluenza Virus Type 3,BPIV-3）和牛病毒性腹泻病毒（Bovine Viral Diarrhea Virus,BVDV）。根据BHV-1的gB基因、BRSV的F基因、BPIV-3的M基因和BVDV的5’UTR基因保守区序列设计特异性引物和Taq Man荧光探针。经条件优化,通过特异性试验、敏感性试验和重复性试验并建立标准曲线对多重荧光PCR方法进行验证,成功建立了BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV的四重荧光PCR检测方法。结果显示,该方法对牛布氏杆菌、猪瘟病毒、小反刍兽疫病毒、羊多杀性巴氏杆菌无特异性扩增,BHV-1、BPIV-3和BVDV最低可检测到8.268 copies/μL,BRSV最低可检测到82.68 copies/μL。CV值从1%到2%不等,证明该方法特异性强、敏感性高、重复性和稳定性好。应用本方法共检测湖南省内不同屠宰场1489份样品,结果表明BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV等4种病原均有检出,其阳性率分别为0.74%,1.07%,0.67%和1.07%,存在病毒混合感染情况。本研究建立了一种可以同时快速检测BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV的多重荧光PCR方法,为牛呼吸道病毒病的鉴别诊断和检测提供了一种快速,简单的方法。
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