【摘 要】
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目的:本文主要研究M2型丙酮酸激酶（pyruvate kinase M2,PKM2）和Notch1在人结直肠癌组织标本及体外培养的结直肠癌细胞系RKO和HT29中的表达及其临床意义,以期为结直肠癌的靶向治疗提供新的研究思路。方法:1.收集66例经我院病理活检诊断为结直肠癌的手术标本,通过免疫组化法检测所收集手术标本中PKM2和Notch1在蛋白水平的表达,并分析两者表达水平之间的相关性,以及两者的
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目的:本文主要研究M2型丙酮酸激酶（pyruvate kinase M2,PKM2）和Notch1在人结直肠癌组织标本及体外培养的结直肠癌细胞系RKO和HT29中的表达及其临床意义,以期为结直肠癌的靶向治疗提供新的研究思路。方法:1.收集66例经我院病理活检诊断为结直肠癌的手术标本,通过免疫组化法检测所收集手术标本中PKM2和Notch1在蛋白水平的表达,并分析两者表达水平之间的相关性,以及两者的表达与结直肠癌患者临床病理数据之间的关系。2.我们采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR,q RT-PCR）、蛋白免疫印迹法（western blot,WB）的方法检测人正常结直肠上皮细胞NCM460和人结直肠癌细胞株RKO、HT-29中PKM2和Notch1的在核酸水平及蛋白质水平的表达情况。3.分别在人结直肠癌细胞株RKO、HT29中加入PKM2抑制剂化合物3k（compound3k）、Notch1抑制剂橘皮素（tangeretin）及同时加入PKM2和Notch1抑制剂,培养24h后采用CCK-8法、划痕实验检测RKO和HT29细胞的活力及增殖侵袭能力,采用q RT-PCR、western blot的方法检测PKM2和Notch1在核酸水平及蛋白质水平的表达情况。结果:1.66例结直肠癌患者手术标本中PKM2和Notch1的表达阳性率分别为71.2%（47/66）、68.2%（45/66）,且两者在结直肠癌组织中的表达存在显著的正相关性（r=0.356,P<0.01）;PKM2的表达与性别（p=0.012）、年龄（p=0.016）、肿瘤分期（p=0.01）及淋巴结转移（p=0.047）之间存在有显著的相关性,Notch1的表达与肿瘤分期（p=0.041）、淋巴结转移（p=0.028）之间存在显著相关性。2.q RT-PCR、Western blot结果表明,PKM2和Notch1在结直肠癌细胞株RKO和HT29中,无论是核酸水平还是蛋白水平表达均明显高于人结直肠正常粘膜上皮细胞NCM460。3.抑制PKM2或Notch1的表达均可抑制结直肠癌细胞的增殖和侵袭能力,而同时抑制PKM2和Notch1的表达,将会增强这种抑制作用。4.抑制PKM2的表达后,Notch1的表达下降;同样地,抑制Notch1的表达后PKM2的表达下降;compound3k和tangeretin具有协同抑制作用。结论:1.PKM2和Notch1在结直肠癌中高表达,其表达水平与患者肿瘤分期及淋巴结转移有关。2.PKM2/Notch1形成了一个促进结直肠癌发生、发展的正反馈回路,抑制PKM2和Notch1的表达对结直肠癌细胞的增值和侵袭具有协同作用。3.用PKM2抑制剂compound3k和Notch1抑制剂tangeretin同时抑制PKM2和Notch1可能是治疗结直肠癌的一种新颖有效的策略。
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