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目的:过敏性鼻炎（Allergic Rhinitis,AR）是特异性个体对外界过敏原免疫反应过强而引起的炎症性疾病。研究认为,胸腺基质淋巴生成素是过敏性疾病中Th2型炎症反应的重要启动因素,因此进一步探究其作用机制任具有研究意义。本课题组发现,治疗过敏性鼻炎习用方小青龙汤中的有效成分儿茶素,在体内外均表现出良好抗炎活性,故本研究推测儿茶素可能是小青龙汤的重要药效物质之一。本研究基于胸腺基质淋巴生成素（Thymic stromal lymphopoietin,TSLP）探讨儿茶素对过敏性鼻炎治疗作用及其可能的治疗机制,同时也为儿茶素的临床应用提供依据。方法:1.儿茶素对过敏性鼻炎小鼠的药效学研究1.1儿茶素对过敏性鼻炎小鼠的治疗作用:本研究采用卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）建立过敏性鼻炎小鼠模型,即选用无特定病原体（Specific pathogen free,SPF）级的八周龄Balb/c雌性小鼠,随机分成正常组、模型组、氯雷他定组（2mg/kg）及儿茶素组（75,150,300mg/kg）,每组8只。正常组分别于第0、7、14天腹腔注射300μl的PBS,其他组小鼠则注射300μL含25μg OVA、1mg氢氧化铝的PBS完成基础致敏。从第21天至27天,在完成灌胃反渗透（Reverses Osmosis,RO）水或药物30min后,正常组滴入40μL的PBS,其他组小鼠则鼻部给予1mg OVA激发,同时记录滴鼻激发后小鼠10min内连续挠鼻和打喷嚏的次数。造模开始后的第29天,快速处死小鼠并获取小鼠血清、鼻部和肺组织样品,并使用兽用血细胞分析仪检测外周血中白细胞的变化。部分鼻部及肺组织经过4%多聚甲醛固定后,用于病理切片。1.2儿茶素对过敏性鼻炎小鼠Th2炎症的影响:通过ELISA法检测过敏性鼻炎小鼠血清及肺组织匀浆上清中IL-5、IL-13的含量。采用流式细胞术检测外周血CD4+T淋巴细胞中Th1与Th2的比例,再用PE和APC荧光素标记对应的IL-4和INF-γ后,用流式细胞仪检测其相对荧光强度。1.3儿茶素对过敏性鼻炎小鼠TSLP表达及其调控因子的影响:采用ELISA法检测过敏性鼻炎小鼠肺组织匀浆上清中TSLP的含量,免疫组化法检测小鼠鼻黏膜TSLP、NF-κBp65蛋白的表达情况。蛋白印迹法检测AR小鼠肺组织中IκBα、NF-κBp65蛋白的含量,同时通过组织免疫荧光检测小鼠肺组织NF-κBp65核转录的情况。2.儿茶素对人鼻黏膜细胞株（HNEp Cs）表达TSLP及其调控因子的影响本研究首先用MTT法考察儿茶素对HNEp Cs的细胞毒剂量,筛选出无毒剂量。以20μg/m L的TLR3激动剂poly（I:C）刺激HNEp Cs,建立TSLP体外释放模型,同时给与儿茶素干预。通过ELISA法检测HNEp Cs培养上清中TSLP的含量,并采用蛋白印迹法检测poly（I:C）刺激后,HNEp Cs表达TSLP、IκBα、p-NF-κBp65、NF-κBp65的表达情况。结果:1.儿茶素对过敏性鼻炎小鼠的药效学研究:通过OVA+铝佐剂基础致敏及OVA激发后,小鼠表现出连续挠鼻、反复打喷嚏的过敏性症状,且其血清中OVA特异性Ig E的含量相应的升高。给予儿茶素治疗后,过敏性鼻炎小鼠的过敏性症状显著缓解及血清中OVA特异性Ig E的含量明显降低。白细胞三分类检测结果表明AR小鼠外周血中白细胞、淋巴细胞、单核细胞、粒细胞的比例均表现出上升的趋势,且儿茶素可抑制白细胞的增多,尤以高剂量明显。此外HE染色结果显示,AR组中小鼠鼻黏膜表现出组织增厚的情况,其中在黏膜的分泌腔周围聚集着大量的淋巴细胞;而在肺组织中,淋巴细胞主要集中在气管周围。同时,我们发现儿茶素亦可抑制过敏性鼻炎小鼠炎症细胞的浸润,缓解局部组织的炎症反应。2.儿茶素对过敏性鼻炎小鼠Th2炎症的影响:通过ELISA法检测血清及肺组织Th2细胞因子的含量,发现AR小鼠体内血清和肺组织匀浆液中Th2因子IL-5和IL-13均表达升高,同时给予儿茶素治疗后可明显减少Th2因子的含量,并呈一定的剂量依赖性。流式实验结果显示AR小鼠外周血中出现Th2比例上升,Th1与Th2失衡的现象,而儿茶素可显著恢复Th1与Th2之间免疫平衡。3.儿茶素对过敏性鼻炎小鼠TSLP表达及其调控因子的影响:免疫组化检测结果显示过敏性鼻炎小鼠鼻黏膜上TSLP与NF-κBp65的表达情况同步变化且儿茶素干预后可明显抑制这两个蛋白含量的升高,同时儿茶素亦可减少肺匀浆液中TSLP的含量。儿茶素同样可以影响TSLP的上游调控因素,NF-κB炎症通路。蛋白印迹结果表明儿茶素可以抑制过敏性鼻炎小鼠肺组织中NF-κB通路的活化,表现为缓解胞浆中IκBα蛋白的降解,恢复浆蛋白中NF-κBp65及降低核蛋白中NF-κBp65蛋白的含量。此外组织免疫荧光也进一步证明儿茶素对NF-κBp65蛋白活化的影响。结果表明,儿茶素可抑制小鼠肺组织中NF-κBp65的核转录。4.儿茶素对人鼻黏膜细胞株（HNEp Cs）TSLP表达及其调控因子的影响:本研究发现HNEp Cs经过poly（I:C）刺激24h后,其培养上清中TSLP的含量高于空白对照组,且这种差异具有统计学意义,儿茶素治疗后可减少TSLP的分泌,尤以高剂量最为明显。此外,我们通过蛋白印迹法检测HNEp Cs浆蛋白中TSLP蛋白的含量,结果表明poly（I:C）可诱导HNEp Cs表达TSLP蛋白,儿茶素也表现出抑制TSLP表达的作用。蛋白印迹结果同样也显示儿茶素可抑制p-NF-κBp65的活化、细胞核中NF-κBp65的含量及IκB蛋白的降解。免疫荧光结果也进一步证明儿茶素对NF-κBp65蛋白活化的影响,结果表明儿茶素可抑制poly（I:C）刺激引起的NF-κBp65的核转录。结论:儿茶素可缓解过敏性鼻炎小鼠过敏症状及炎症反应,其潜在的机制可能是儿茶素通过影响NF-κB/TSLP通路,抑制了上皮细胞表达TSLP因子。