【摘 要】
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目的:观察MPTP和MPP+诱导的PD模型中mi R-142-3p、BMAL1的表达变化;分析mi R-142-3p对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞毒性作用的影响;探索mi R-142-3p对BMAL1基因的靶向调控作用。实验方法:（1）选取18只SPF级8周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为实验组和对照组。实验组制备MPTP亚急性PD小鼠模型,对照组注射等量生理盐水。模型制备完成后三天进行行
【基金项目】
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国家重点研发计划资助《帕金森病（PD）治疗新方法和新技术研究》（项目批号:2017YFC1310200）； 国家重点研发计划资助《帕金森病的发病机制与危险因素研究》（项目批号:2016YFC1306000）； 国家自然科学基金面上项目《环境毒素联合VMAT2遗传操控建立帕金森病动物模型的研究》（项目批号:81471305）；
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目的:观察MPTP和MPP+诱导的PD模型中mi R-142-3p、BMAL1的表达变化;分析mi R-142-3p对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞毒性作用的影响;探索mi R-142-3p对BMAL1基因的靶向调控作用。实验方法:（1）选取18只SPF级8周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为实验组和对照组。实验组制备MPTP亚急性PD小鼠模型,对照组注射等量生理盐水。模型制备完成后三天进行行为学鉴定（爬杆实验）。对小鼠黑质和纹状体切片进行免疫组化染色,观察TH表达。提取小鼠黑质部位RNA进行实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测mi R-142-3p表达,提取小鼠黑质部位蛋白进行western blot检测BMAL1的表达;（2）培养SH-SY5Y细胞,给予梯度浓度MPP+刺激（0、20、50、100μM）,提取RNA后RT-PCR检测各处理组mi R-142-3p表达;提取蛋白进行western blot检测BMAL1的表达;（3）mi R-142-3p模拟物（mimics）、mi R-142-3p模拟物对照（mimics NC）、mi R-142-3p抑制剂（inhibitor）和mi R-142-3p抑制剂对照（inhibitor NC）处理SH-SY5Y细胞,RT-PCR检测mi R-142-3p表达,验证干预效果;（4）在96孔板上接种SH-SY5Y细胞,设置空白对照组、MPP+组、mimics+MPP+组、mimics NC+MPP+组、inhibitor+MPP+组、inhibitor NC+MPP+组,培养24小时后,加入CCK-8试剂检测计算细胞活力值。（5）使用mi R-142-3p的mimics、mimics NC、inhibitors和inhibitors NC对SH-SY5Y细胞进行转染,给予100μM浓度MPP+刺激,24小时后免疫印迹（western blot）检测BMAL1蛋白表达。实验结果:（1）MPTP亚急性PD模型小鼠黑质mi R-142-3p表达下降、BMAL1蛋白表达下降;MPP+处理的SH-SY5Y细胞模型中,mi R-142-3p的表达随着MPP+浓度增加呈现梯度降低,BMAL1蛋白表达无差异。（2）抑制mi R-142-3p的表达,使得细胞活性降低。（3）mi R-142-3p抑制BMAL1蛋白的表达。实验结论:（1）miR-142-3p转录后调节BMAL1表达。（2）mi R-142-3p减轻MPP+诱导的多巴胺能神经元损伤。
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