弓形虫（Toxoplasma gondii,T.gondii）是一种机会致病性的胞内寄生原虫,其对温血动物的感染范围甚广,可引起全球性的人畜共患病。动物体内多个器官都可以成为弓形虫的攻击对象。在经口感染后,弓形虫会穿过消化道进入血液循环系统,然后被运输到多个组织或细胞进行增殖,易引发多个器官的炎症。弓形虫对脑部的伤害尤为严重,有高风险的继发性瘫痪,研究表明超过九成死于弓形虫病的患者是弓形虫脑炎所致。弓形虫入脑后长久存在,动物机体免疫力低下容易诱发脑炎。同时也与多种神经症状的疾病密切相关,影响动物的行为。根据弓形虫的毒力强弱可分类为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型,其中以Ⅱ型虫株流行最为广泛。Me49虫株在多种动物中均能分离,是Ⅱ型弱毒虫株的典型代表,具有嗜神经性,能穿越血脑屏障入侵中枢神经系统,并转化为缓殖子长期存在,对动物的记忆、学习和辨识能力造成损伤。弓形虫在养殖场大范围流行会降低经济动物的产能,造成严重的经济损失。补体分子C3是激活先天性免疫补体系统的重要生物分子,补体分子C3在激活状态会迅速裂解成C3a与C3b,其裂解物C3a蛋白在炎症的发生及抗炎功能上都有重要的作用。本课题组先前已经证明,弓形虫入侵中枢神经系统会诱导补体分子C3的高表达。研究补体C3a在弓形虫入侵脑组织过程中的细胞作用,可以帮助理解弓形虫的入侵机制以及对精准选择预防及治疗弓形虫脑炎的药物有重要意义。本文运用了透射电子显微镜技术、相对荧光定量PCR技术、Western Blot技术、Pull down技术等多种方法,将补体C3a对微血管内皮细胞的作用进行综合性分析。针对C3a在弓形虫入侵脑组织过程中对血脑屏障的作用进行C3a抑制剂的筛选,以抵御弓形虫对血脑屏障的攻击。我们在过往研究中已经证实补体C3a可以促进弓形虫入侵中枢神经系统。通过本研究,我们发现C3a促进弓形虫入侵的作用可能是通过影响紧密连接蛋白或细胞骨架蛋白实现的;构建出C3a的原核表达蛋白,通过Pull down联合LC/MS技术对C3a与微血管内皮细胞膜蛋白的互作蛋白进行筛选;最后根据C3a对细胞的作用特点,检测CVF,C3a R拮抗剂,NSC23766及Anax1对抗弓形虫入脑的能力,发现C3a R拮抗剂对弓形虫入脑的抑制能力最优,CVF、Anax1及NSC23766次之,且三者之间的抑制能力差异性不明显。筛选出能抑制弓形虫入脑的补体C3a抑制剂,对预防和治疗弓形虫脑病的药物研发有重要意义。