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肠产毒性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,,ETEC)是引起幼畜腹泻的主要病原之一。据统计，国内大约有35%的仔猪腹泻是因感染ETEC引起的；美国等国家新生仔猪腹泻中，由ETEC引起的占45%以上。ETEC所导致的腹泻发病率和死亡率都很高，给畜牧产业的发展造成了极其严重的经济损失。目前，世界各国都在致力于开发有效的疫苗来防治ETEC所引起的腹泻。ETEC致病因子主要包括肠毒素(enterotoxins)和黏附素(定居因子,fimbriae)。当病原菌感染宿主后，ETEC通过菌毛黏附到小肠黏膜上皮细胞刷状缘受体上，使ETEC在肠道内定居繁殖，释放肠毒素，与小肠细胞膜上的特异受体结合，引发细胞内水、电解质失衡，造成细胞吸收障碍，导致腹泻的发生。猪源ETEC的黏附素类型主要有K88、K99、987P、F17，F18、F41、F42;其中，引起仔猪腹泻的菌毛主要以K88为主。肠毒素包括不耐热肠毒素（Heat-labileenterotoxin，LT）和耐热肠毒素（Heat-stable enterotoxin，ST）两种。LTb是大肠杆菌不耐热肠毒素的亚单位，因其具有无毒性且有很好黏膜免疫佐剂效果而被广泛研究应用。鼻黏膜组织分布着鼻相关淋巴组织和丰富的血管，通过鼻腔免疫能够产生有效的免疫反应，且免疫途径方便。在本试验研究中，将K88和LTb通过鼻腔免疫BALB/c小鼠，期望能够刺激机体产生特异性的黏膜和系统免疫反应。为开发一种针对ETEC的安全有效、免疫接种方便的新型基因工程疫苗提供新的研究思路。目的：将产肠毒素大肠杆菌K88菌毛蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素LTb分别重组到原核表达载体中，得到纯化后的重组蛋白后经鼻腔接种免疫小鼠，观察免疫效果。方法：用PCR技术扩增出不含信号肽的K88和LTb基因，重组到表达载体pQE30上，转化到大肠杆菌M15中进行表达，将表达产物K88、LTb进行纯化、复性，分别用K88、K88与LTb滴鼻免疫BALB/c小鼠，ELISA分析各组特异性抗体水平。结果：重组蛋白K88、LTb在大肠杆菌M15中获得高效表达，经亲和层析后蛋白纯度大于95℅。滴鼻免疫BALB/c小鼠试验表明， K88与LTb联合滴鼻免疫组血清特异性IgG及鼻腔、小肠黏膜冲洗液中特异性IgA水平均明显增高，与K88单独免疫组和对照组相比较差异显著(P＜0.01)。结论：K88与LTb滴鼻免疫BALB/c小鼠后，不仅可以增强特异性血清抗体反应，而且诱导了黏膜部位产生免疫应答。通过本试验研究可以为将来开发新型的ETEC基因工程疫苗奠定基础。