目的:在细胞水平探讨PDK1对成骨细胞增殖过程的影响及其可能的影响机制,为了解成骨细胞增殖分化具体机制提供理论基础。方法:选用小鼠成骨细胞前体细胞系MC3T3-E1为研究对象,建立体外培养模型。将细胞分为三个培养组:C组,培养基为完全培养基;P+组,培养基为完全培养基+PDK1激活剂(10nM);P-组,培养基为完全培养基+PDK1抑制剂(10nM)。按以下顺序进行培养和相关检测:(1)成骨细胞培养体系鉴定:MC3T3-E1细胞系进行普通培养72h后,进行ALP染色;培养14天后,进行矿化结节染色。(2)对数增长期的确定:C组、P+组和P-组分别于24h、48h、72h、96h和120h进行细胞增殖检测。(3)C组、P+组和P-组在培养72h后进行免疫荧光染色。(4)C组、P+组和P-组在培养72h后进行碘化丙啶染色,然后用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况。(5)C组、P+组和P-组在培养72h后进行mRNA提取,RT-PCR法检测Runx2和c-fos的表达。结果:(1)MC3T3-E1细胞系可以成功向成骨细胞分化。(2)72h时,C组、P+组和P-组细胞均处于对数增长期。(3)C组细胞多且密集,细胞核在单个细胞中所占的面积比例最大。(4)P-组细胞的SPF%值显著低于C组和P+组,凋亡率显著高于C组和P+组。(5)P+组和P-组成骨细胞的Runx2的mRNA的表达水平均显著高于C组。(6)P-组成骨细胞的c-fos的mRNA的表达水平显著高于C组。结论:(1)在成骨细胞的分化过程中,正常水平的PDK1促进成骨细胞的增殖。(2)在成骨细胞的增殖期,正常水平的PDK1维持成骨细胞的细胞骨架形态、促进成骨细胞DNA的合成、抑制成骨细胞的凋亡、抑制Runx2和c-fos的mRNA的表达。