目的：皮瓣移植术已被广泛应用于多项外科手术操作中，而术后由于局部微循环障碍尤其是静脉回流障碍引起的静脉危象是移植术后的严重并发症之一，极易进一步造成皮瓣部分或全部坏死，导致手术失败。细胞的凋亡与增殖是组织坏死与存活的标志，而凋亡与增殖基因的表达又是细胞凋亡增殖的标志性特征。本实验采用持续负压引流方法治疗皮瓣移植或转移术后因微循环障碍造成的皮瓣部分或全部坏死，并应用分子生物学方法研究不同处理方法作用不同时间后各实验组中组织细胞凋亡基因Caspase-3、增殖基因Ki67表达的变化，来评价持续负压引流方法对于皮瓣淤血性坏死的疗效，从分子生物学角度验证此方法能更有效的预防和治疗皮瓣静脉淤血性坏死，从而为临床上防治皮瓣移植术后皮瓣静脉淤血性坏死，促进移植皮瓣组织的存活，提供新的方法和理论依据。方法：1实验动物：健康清洁级纯种新西兰大白兔40只，雌雄各半，重量2.5-3kg。2实验动物分组：每只大白兔可造腹部淤血皮瓣模型2个，共80个皮瓣模型，随机编号分组为4组，即空白对照组（造淤血模型并不进行任何处理）；再通组（淤血后4小时恢复静脉回流）；近端引流组（将负压引流管置于淤血皮瓣近端）；远端引流组（将负压引流管置于淤血皮瓣远端），每组20个皮瓣模型，其中大体观察皮瓣12个，取材皮瓣8个。3静脉淤血皮瓣制备方法：于术前三天，对各组实验用兔行脱毛剂（5%硫化钠）腹部脱毛，脱毛面积起自两侧腹股沟，向上至剑突，两侧至腋中线范围，温水冲洗自然晾干，使用纱布垫及弹力网套包裹保温并防止腹部皮肤与笼网挫伤。麻醉方法采用盐酸塞拉嗪（速眠新）和氯胺酮以1:1等比例，0.2ml/kg体重肌肉注射麻醉，根据麻醉效果可于1小时后再次追加0.1ml/kg剂量药液维持麻醉。麻醉成功后，将实验用兔以仰卧位固定于兔台，捆绑牙线。0.5%碘伏消毒术区，于兔下腹部腹壁浅静脉为轴心设计轴行皮瓣，面积约12×4cm2，并依据不同分组对相应血管进行处理。4取材：各组取材皮瓣于造模术后即刻、4h、8h、24h、3d、7d六个时间点，分别取皮瓣中远端部位皮肤组织，大小约1.0×1.0cm，皮瓣组织取下即刻置于液氮冷冻保存。5检测方法及检测指标：5.1、拍照进行大体观察并用photoshop软件进行像素法分析淤血皮瓣在不同处理方法下坏死区域的大小。5.2、对取材皮瓣组织进行PCR（Polymerase Chain Reaction聚合酶链反应）分析，检测细胞凋亡基因caspase-3、增殖基因ki67的表达变化。6统计学处理：采用spss17.0软件对数据进行统计学检验，所有数据以均数±标准差（x±s）表示，显著性分析以P<0.05为差异具有统计学意义。结果：1大体观察：淤血皮瓣造模后4h，各组皮瓣外观肿胀，皮瓣远端呈紫红色，尤以空白对照组明显，其肿胀面积及紫红色范围最大，且程度改变情况与时间呈正相关。8h后可见皮瓣肿胀程度加重，颜色改变区域范围逐渐增加。空白对照组程度最重，其次是近端引流组,远端引流及再通组情况较轻。24h后各组皮瓣肿胀程度进一步加重，空白对照组远端大约1/3皮瓣面积呈暗紫色，表面有黑褐色斑片状坏死形成，按压可及皮瓣下波动感。远端引流组、近端引流组、再通组皮瓣肿胀、颜色改变情况较空白对照组轻微。其中远端引流组肿胀及暗紫色范围最小，且皮瓣下负压吸引管引流出血性液体约2ml，较近端引流组量多。3d后各组皮瓣肿胀程度减轻，皮瓣颜色改变区域界限逐渐清晰。远端引流组、近端引流组、再通组皮瓣颜色改变区域明显小于空白对照组，远端引流组、再通组较近端引流组肿胀程度轻、皮瓣暗紫色范围小，远端引流与再通组别无明显差异。7d各组皮瓣肿胀消失、远端暗紫色区域范围固定。部分区域可见黑褐色痂皮形成，质硬，界限清楚。2photoshop像素法分析将兔水平固定于兔台，充分暴露腹部，使相机位于腹部平面正上方，拍摄照片并保存入计算机，使用photoshop cs5.0软件对皮瓣坏死区域及整个皮瓣范围进行像素计算，按照公式：皮瓣坏死率=皮瓣坏死区域像素值÷皮瓣总像素数值×100%进行计算，得出各组皮瓣坏死率。进一步进行统计学比较。发现各组与空白对照组之间有统计学意义（P<0.05），皮瓣远端引流与再通组之间差异不明显（P>0.05），皮瓣远端引流组、再通组与近端引流组之间差异有统计学意义（P<0.05）。3PCR检测结果：3.1应用PCR检测不同时间点各实验组中缺血皮瓣caspase-3的表达情况经测定术后不同时间点（即刻、4h、8h、24h、3d、7d）近端引流组、远端引流组、再通组、空白对照组中caspase-3的表达量。术后即刻各实验组caspase-3的表达量分别为（63.00±2.81），（63.42±5.36），（65.32±4.73），（68.12±4.66）；术后4h为（70.41±7.60），（59.84±7.15），（65.73±7.08），（79.70±8.83）；术后8h为（89.82±5.31），（76.91±8.04），（81.76±5.84），（106.14±11.50）；术后24h：（162.80±8.32），（149.09±10.60），（156.73±15.76），（189.92±7.76）；术后3d：（171.57±6.70），（155.75±6.44），（163.11±7.19），（204.52±10.22）；术后7d：（163.22±8.65），（153.60±8.55），（157.03±9.60），（163.10±6.74）。4h-3d时间段内各实验组与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）,7d时各组间比较无明显统计学差异，同一时间点，各实验组相比远端引流、再通组与近端引流组比较有统计学意义。术后即刻、4h、8h、24h、3d、7d近端引流组、远端引流组、再通组、空白对照组中组织细胞增殖基因ki67的表达量依次为：即刻:（55.21±7.50），（56.84±7.00），（55.94±8.03），（58.83±10.15）4h:（135.58±7.55），（151.37±5.69），（146.62±8.10），（109.47±7.20）；8h:（146.14±8.14），（173.48±4.49），（168.60±5.57），（127.15±8.72）；24h:（148.68±9.44），（181.29±8.63），（175.59±8.80），（123.27±24.75）；3d:（149.86±7.55），（171.80±7.55），（165.05±6.95），（127.52±9.13）；7d（:126.07±10.30），（131.84±13.44），（128.81±16.10），（127.34±12.71）。经测定，术后4h、8h、24h、3d不同时间点各组间数据比较有统计学意义（P<0.05），术后即刻与7d两时间点各不同处理方法组间无明显统计学差异;术后3d内细胞凋亡基因caspase-3含量逐渐增加，细胞增殖基因ki67含量逐渐增加，并于3d时达到峰值。结论：1细胞凋亡基因caspase-3与细胞增殖基因ki67参与了静脉淤血皮瓣组织细胞的凋亡和增殖过程。2持续性负压吸引对于防治皮瓣移植术后出现的皮瓣静脉淤血有显著作用，可以减轻静脉淤血皮瓣的肿胀，促进皮瓣组织的存活。3在皮瓣远端放置负压引流管进行负压吸引治疗，较近端放置能更为有效的减轻静脉淤血皮瓣远端的微循环障碍，减少皮瓣下血液及其他坏死物质的淤积，促进皮瓣远端组织的生长愈合，提高静脉淤血皮瓣组织的存活率。